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胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，我国胃癌的发病率和死亡率均居首位，手术是主要的治疗措施，由于多数患者有不同程度微转移的存在，术后大部分病人面临着复发和转移的危险。局部进展期转移癌以及术后复发转移的晚期患者临床上十分常见，化疗在胃癌综合治疗中处于不可缺少的重要地位。胃癌对化疗相对敏感，目前国内外常用的化疗方案有效率在40～60％，进一步提高疗效是亟待解决的问题。为了提高化疗的疗效，医学工作者开展了多方面的研究，如开发新的高效低毒的药物，更科学合理联合用药以协同增效，选择更优化的给药途径减小对正常组织的毒性以及特异性靶向治疗的研究等，并不断取得了新的进展。 拓扑异构酶(topoiomerae，Topo)是核基质的成分，是重要的核酶，具有调整DNA拓扑结构的作用，与DNA的复制，DNA的重组，基因转录以及DNA损伤后的修复等有着十分密切的关系。而且在肿瘤的多药耐药，肿瘤细胞的凋亡等方面有着重要的意义。肿瘤组织中拓扑异构酶的含量显著高于周围正常组织，抑制该酶的活性可以抑制肿瘤细胞的生长，因此，拓扑异构酶成为抗肿瘤药物作用的重要靶点。拓扑异构酶抑制剂是近年来发展迅速的一类抗肿瘤药物，包括拓扑异构酶Ⅰ抑制剂和拓扑异构酶Ⅱ抑制剂，在胃癌的治疗上占有重要的地位。依托泊甙(etoposide，VP-16)和替尼泊甙(tiniposide，VM-26)是常用的拓扑异构酶Ⅱ抑制剂，二者作用机制相似，前者是胃癌常用方案中重要的组成药物之一。基础研究表明，VM-26对细胞DNA的破坏作用是VP-16的6-10倍，在淋巴瘤，脑瘤，肺癌等治疗上有很好的疗效。但VM-26在胃癌上的应用甚少，值得进一步的研究郑州大学医学院2004届硕士学位论文以替尼泊贰为主联合用药对胃癌细胞的作用探讨。尤其是VM一26联合用药对胃癌细胞作用的基础研究，国内外文献未见报道。本实验拟多种实验方法，观察以VM一26为主的联合用药对胃癌细胞的体外抗瘤活性和诱导细胞凋亡的能力，观察联合用药价值，初步探讨其作用机制，期望为开发高效安全的临床化疗方案提供科学的实验依据。材料与方法:(1)细胞选用人胃腺癌细胞株BGC一823;(2)实验药物选用VM一26以及常用的化疗药物顺铂(eis一dismine diehoroplatinum，DDp)，5一氟尿哦陡(5一且uorouracil，5一FU)，紫杉醇(paclitaxel，TAX)，经基喜树碱(Hydroxyeampto山eein，HCpT)，VP一16等;(3) MTT比色法测定单药及联合用药的不同浓度处理后细胞的生长抑制率，(4)并选用较小的浓度组用流式细胞仪检测细胞的周期分布和凋亡率的变化。 (5)免疫组化测定凋亡相关基因p53，S盯vivin的蛋白表达的影响。(6)实验数据采用SPSSIO.0统计软件处理，计量资料，采用正态性检验，方差齐性检验均数间的两两比较采用LSD方法;率的比较采用XZ检验，单样本t检验，以a均.05为检验水准。结果: (1) MTF法结果显示不同浓度的VM一26，VP一16，TAX，DDP，5~FU，HCPT等药物处理细胞48h后，处理组与对照组以及各处理组之间OD值的差异均有统计学意义(p<0.05)，各药物的IC5o值分别为5.278p留ml，59.98。留ml，4·23p留ml，7·o66p留ml，195.54。留ml，27.42协目ml。结果表明，VM一26等药物可有效的抑制胃癌细胞BGC一823的生长，其抑制效应在一定的浓度范围内存在着剂量效应关系。在相同摩尔浓度下，对胃癌细胞的抑制作用由强到弱为1认X>VM一26>DDP>HCPT>VP一16>5~FU。 (2)VM一26与DDP，5~FU，TAX，HCPT等药物联合处理细胞48h后，处理组与对照组以及各处理组之间的OD值差异均有统计学意义(P<0.05)。结果表明，VM一26分别与TAX，DDP，5一FU，HCPT等药物联合可有效的抑制胃癌细胞BGC~823的生长，其抑制效应比单药的抑制效应增加，相同抑制效应时，药物剂量减少。联合用药时对胃癌细胞的抑制作用由强到弱VM一26心DP>VM一26尹丁AX>VM一26/5~FLJ>VM绝6邢CPT。郑州大学医学院2004届硕士学位论文以替尼泊试为主联合用药对胃癌细胞的作用 (3)流式细胞仪结果显示，VMse26处理细胞后流式细胞图上出现典型的亚二倍体凋亡峰。在0，12，24，48h细胞的凋亡率为3.9%，4.42%，7.36%，17.07%。VM一26处理细胞后，在0，12，24，48h，G0/G，，GZ/M细胞为45.84%，52.12%，35.73%，4.9%:20.03%，18.82%，28.81%，85.49%。与oh相比，细胞凋亡和周期的变化有统计学意义(P<0.05)。结果表明，VM一26处理细胞后GZ/M期细胞阻滞，G0/G1期细胞减少;VM一26可诱导胃癌细胞凋亡。 (4)DDP单药处理细胞后，流式细胞图上出现典型的亚二倍体凋亡峰。在0，12，24h，细胞凋亡率为3 .9%，6.13%，14.48%。GZ/M细胞为20.62%，15.31%，12.30y0，0.32%;S期，G0/G;期细胞呈增多趋势。与VM一26联合后凋亡率为3.9%，11.01%，14.75%，46.11%;GZ/M期细胞为20.62%，13.22%，21.39%，0.74%。与0h相比，细胞凋亡和周期的变化有统计学意义(P<0.05)。结果表明DDP可诱导胃癌细胞的凋亡，使GZ/M细胞减少。与VMee26联合处理细胞凋亡率较单药时增加，细胞周期分布也与单药不同。 (5)5一FU单药处理细胞后，流式细胞图上出现典型的亚二倍体凋亡峰。