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小胶质细胞(Microglia)异常活化所介导的神经炎症与多种中枢神经系统疾病有关。小胶质细胞异常活化释放白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(Interleukin 6,IL-6)等多种炎症因子。上述炎症因子的持续大量释放,会直接损伤神经元,或进一步激活小胶质细胞形成恶性循环,最终导致神经元逐渐退行性改变或死亡而发生阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)、帕金森病(Parkinson’s disease,PD)等神经退行性疾病。因此,对小胶质细胞异常活化进行有效的抑制已成为抗AD、PD药物研究的极具潜力的靶标。本课题研究组前期研究首次发现,传统中药龙血竭(Dragon’s Blood,LXJ)具有显著的小胶质细胞活化的抑制作用,且在发挥作用的浓度下未表现出明显毒性。我们以活性为导向从活性部位中分离鉴定了20个单体化合物,初步的活性评价结果显示:8号单体化合物(LXJ-8)的活性较强、且含量较高。本文在此基础上,采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)所诱导小胶质细胞活化的模型,综合运用Real time PCR、Western-blot、ELISA、免疫荧光等实验技术,系统研究LXJ-8抑制小胶质细胞异常活化的作用及其可能机制。Griess实验结果表明,LXJ-8(10,100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞NO的释放,ELISA实验结果表明,LXJ-8(1,10,100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞IL-1β的释放,LXJ-8(10,100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞IL-6的释放。Real time PCR实验结果表明,LXJ-8(1,10,100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA的表达,LXJ-8(10,100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞IL-1βmRNA的表达,LXJ-8(1,10,100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞IL-6 mRNA的表达。Western-blot实验结果表明,LXJ-8(100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞TLR4蛋白的表达。进而针对丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)家族及Akt通路进行了研究,结果表明,LXJ-8(1,10,100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞p-JNK、p-p38的蛋白表达,对p-ERK的表达无明显作用。LXJ-8(1,10μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞细胞核内c-Jun蛋白的表达。LXJ-8(1,10,100μM)对LPS所致N9小胶质细胞p-Akt蛋白的表达无明显影响。Western-blot实验结果表明,LXJ-8(1,10,100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞p-IκBα蛋白的表达,并显著逆转IκBα蛋白的降解;免疫荧光实验结果表明,LXJ-8(100μM)能够显著抑制LPS所致N9小胶质细胞所致的NF-κB p65蛋白的核转位。上述结果提示,LXJ-8对LPS所致N9小胶质细胞活化的抑制作用可能与其对NF-κB、MAPKs信号通路的抑制作用有关。综上所述,本研究首次发现,LXJ-8能够显著抑制LPS所致小胶质细胞NO、IL-6、IL-1β的释放及iNOS、IL-6、IL-1β mRNA的表达,其作用机制可能是通过抑制TLR4介导的NF-κB、JNK-MAPK信号通路而实现的。