论文部分内容阅读
黄姑鱼（Nibea albiflora）作为我国新兴的海水养殖品种,其养殖规模逐年扩大。黄姑鱼仔、稚鱼的营养生理学研究较少,尚无适宜的专用微颗粒饲料,导致其稚鱼转饵阶段成活率低。本研究以黄姑鱼稚鱼为研究对象,通过营养学、组织学和转录组分析等方法,比较生物饵料与不同磷脂水平的微颗粒饲料对黄姑鱼稚鱼及早期幼鱼生长、肠道结构及其相关基因表达的影响。实验选用25日龄（体重为0.005 g,全长为0.53 cm）的黄姑鱼稚鱼进行实验,实验分为5组,以磷脂强化12小时的卤虫作为对照组（生物饵料组,Live prey组）,在基础饲料中添加0%大豆磷脂为阴性对照组（磷脂实测值3.84%,PL0组）,以大豆磷脂添加4%（磷脂实测值6.71%,PL4组）、8%（磷脂实测值9.38%,PL8组）和12%（磷脂实测值12.21%,PL12组）为实验组,养殖周期为28天,期间在39、53 dph时进行取样,实验结果如下:1.饲料磷脂水平对黄姑鱼稚鱼和早期幼鱼生长性能、全鱼脂肪酸和氨基酸组成的影响首先比较生物饵料和微颗粒饲料中的脂肪酸组成发现,随着饲料磷脂含量的增加,饲料中MUFA和n-6 PUFA占总脂肪酸比例逐渐下降,而SFA、n-3 PUFA和n-3 LC-PUFA占总脂肪酸比例逐渐上升。随着卤虫强化时间增加,其SFA和n-6 PUFA占总脂肪酸比例呈上升趋势,MUFA、n-3 PUFA以及DHA+EPA占总脂肪酸比例呈下降的趋势。饲料中必需氨基酸和非必需氨基酸含量均高于卤虫和黄姑鱼鱼卵,其中在总氨基酸指标上,饲料>鱼卵>卤虫;饲料与卤虫牛磺酸含量相近,均都高于鱼卵。在39 dph时,饲料磷脂添加显著提高了黄姑鱼稚鱼全长和体重,其中PL8组稚鱼全长显著高于生物饵料组（P<0.05）,但与PL12组无显著差异（P>0.05）;PL8组鱼体重显著高于PL4组,但与其它组无显著差异（P>0.05）。实验结束时（53 dph）对存活率统计发现,生物饵料组和PL12组的存活率最高,显著高于其他各组（P<0.05）。实验期间,黄姑鱼的特定生长率（SGR）随着饲料磷脂含量增加而显著升高,但PL0、PL4组的SGR显著低于生物饵料组（P<0.05）,而PL8、PL12组SGR与生物饵料组无显著差异（P>0.05）。就全长、体长和体重指标而言,PL8组与生物饵料组相当（P>0.05）;PL12组显著高于其它各组（P<0.05）,且该组的肠道长度显著高于其它各组（P<0.05）。随着磷脂含量的增加,PL12组全鱼SFA占总脂肪酸比例显著高于其它各组（P<0.05）;饲料组全鱼的n-6 PUFA、n-3 PUFA和n-3 LC-PUFA占总脂肪酸比例显著高于生物饵料组（P<0.05）;生物饵料组全鱼DHA占总脂肪酸比例显著低于饲料组各组（P<0.05）,生物饵料组的DHA占比仅为饲料组的10%左右,而生物饵料组的EPA占总脂肪酸比例显著高于饲料组（P<0.05）。随着饲料磷脂含量升高,饲料组黄姑鱼早期幼鱼全鱼必需氨基酸与非必需氨基酸含量均呈下降趋势,但饲料组与生物饵料组无显著差异（P>0.05）。值得注意的是,饲料组牛磺酸含量显著低于生物饵料组（P<0.05）。2.饲料磷脂水平对黄姑鱼稚鱼和早期幼鱼肠道结构的影响对39 dph和53 dph时各组的肠道组织切片分析发现,生物饵料组与PL8和PL12组的肠道结构相对完整,而PL0组和PL4组的肠道上皮细胞的数量较少,结构受损明显,呈萎缩的异常状态,出现明显的浆膜层脱落现象。分析53 dph各组的肠道结构发现,PL12组的肠道皱襞高度、肠道肌层厚度以及肠道绒毛周长比显著高于其它组（P<0.05）;生物饵料组的肠道皱襞高度与PL12组相当（P>0.05）,而其肠道肌层厚度低于PL12组,与PL8组相当（P>0.05）。进一步通过AB-PAS染色、透射电镜以及扫描电镜分析各组的肠道组织结构。结果发现PL0组和PL4组染色偏紫色,表明这两组肠道内分泌的主要是中性粘蛋白或糖原;PL4组和PL8组的肠道内容物含有的大量的酸性蛋白,但其上皮细胞内几乎没有此类蛋白;PL12组和生物饵料组的固有层及整体染色较深,表明这两组的肠道组织和细胞内酸性蛋白分泌较多。通过透射电镜分析发现,PL8和PL12组的微绒毛密度与生物饵料组无显著差异（P>0.05）,而PL12组肠道微绒毛高度显著高于PL4和生物饵料组（P<0.05）;通过扫描电镜发现,PL12组和生物饵料组肠道上皮细胞表面界限清晰,排列规则且紧密,且PL12组微绒毛表面具有大量的颗粒分泌物,分布一定的分泌孔,而生物饵料组则较少。3.饲料磷脂水平对黄姑鱼早期幼鱼肠道转录组表达影响的分析使用Illumina测序平台对9个样品构建肠道c DNA文库,并进行转录组检测。比较了PL4组、PL12组及生物饵料组的肠道差异表达基因。PL12 VS.Live prey和PL12 VS.PL4两组分别挑选显著性前20的代谢通路制作气泡图,发现PL12组与生物饵料组相比,差异最显著的代谢通路为牛磺酸和亚硫磺酸代谢通路,在该代谢通路中,PL12组半胱氨酸双加氧酶、半胱氨酸亚磺酸脱羧酶、γ-谷氨酰转肽酶/谷胱甘肽水解酶显著上调,推测可能是由于PL12组相比生物饵料组牛磺酸合成和分解代谢增强。而PL12与PL4组相比,差异最显著的代谢通路是甘油磷脂代谢通路,PL12组被上调的有磷脂酸磷酸酶、乙醇胺磷酸转移酶和二酰甘油胆碱磷酸转移酶,推测其可能的原因是饲料中高水平磷脂添加增强了磷脂的周转代谢;另外,脂肪酸氧化供能关键基因肉毒碱棕榈酰转移酶1表达量上升,表明饲料中高水平磷脂添加增加了肠道对脂肪酸的利用,这可能是高水平磷脂改善肠道结构的原因之一。