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弓形虫是一种细胞内寄生原虫,能感染所有有核细胞。全世界约有1/4的人口感染弓形虫。人感染弓形虫后,大部分速殖子会被免疫系统迅速消灭,少部分速殖子转变为缓殖子,在组织中成包囊的状态；免疫力低下的人感染弓形虫后,会引起一系列并发症,弓形虫病会导致孕妇流产、死产、胎儿畸形等症状,弓形虫病严重危害人类健康。研究表明,MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)在弓形虫速殖子侵入宿主细胞以及在细胞内增殖等过程中发挥重要作用。MAPK属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,存在于多种生物,参与多种细胞的生理过程,包括生长、发育、分裂、分化、死亡以及细胞间的相互作用,由其构成的MAPK途径是细胞信号转导的重要途径。本实验用PCR扩增技术扩增MAPK1基因5’非编码区和3’非编码区,将其分别克隆入载体质粒pminCAT/HXGPRT+中,构建重组质粒。利用电转染技术将重组质粒导入弓形虫,用抗性培养基筛选阳性克隆。经PCR和Southern杂交鉴定,弓形虫MAPK1缺失株构建成功。通过对其生物学特性的研究发现,MAPK1基因的缺失对其正常的生命活动产生了影响。重组质粒的构建利用PCR扩增技术,从弓形虫基因组上扩增MAPK1基因5’非编码区片段(MAPK5’-UTR)和3’非编码区片段(MAPK3’-UTR),将其分别克隆入载体质粒中,经序列测定分析,5’非编码区片段长1620bp,3’非编码区片段长1754bp,与Genebank上发表的弓形虫基因组的同源性为100%。酶切鉴定表明成功构建了pminCAT/HXGPRT+-f-r质粒。弓形虫MAPK1缺失株的筛选及鉴定Asel酶切线性化重组质粒,电穿孔转染导入弓形虫,同源重组整合入弓形虫基因组,阳性克隆因整合进抗性基因而能在筛选培养基中生长,未整合的虫体及阴性对照则死亡,经抗性筛选培养基筛选1月,获得弓形虫MAPK1缺失株。提取缺失株的基因组,特异引物经PCR扩增鉴定,都能扩增出特异条带,MAPK1引物为探针,经Southern杂交,没有出现条带,说明MAPK1基因缺失,弓形虫MAPK1缺失株构建成功。弓形虫MAPK1缺失株生物学特性的研究分别对弓形虫MAPK1缺失株的增殖、粘附实验和对小鼠的毒性实验发现：弓形虫增殖能力降低,对宿主的粘附能力降低,对小鼠的毒性下降。表明弓形虫MAPK1基因的缺失对弓形虫的生理活动造成了重要影响。