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背景:自体脂肪颗粒注射移植因为具备供源充足、取材方便、操作简单、微创无痕、无供区畸形、有良好的组织相容性、手感自然、充盈外形好并能同时获得瘦身塑体的效果等优点,被国内外整形美容外科领域青睐,是人体最理想、最具发展潜力的软组织填充方法,而且脂肪组织最近又被发现是一种内分泌组织,增加了其移植优势。但移植后脂肪细胞吸收率高(30%-70%)、液化、坏死等并发症限制了其在临床的应用。富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)是将全血通过梯度离心得到的血小板浓缩物,能释放丰富的生长因子。很多研究已经证实PRP中的生长因子对软组织和骨组织的愈合有促进作用,且对脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)的增殖有促进作用。ADSCs有多向分化潜能,且具有来源广泛、取材方便、组织损伤小、可分泌多种生长因子等优势,使其成为近年来干细胞研究领域的热点。目的:本实验旨在通过建立裸鼠模型,将兔ADSCs、PRP联合加入自体脂肪颗粒中混合移植,来探讨两者联合对移植后血运重建的影响。方法:1取3月龄新西兰大白兔颈背部区脂肪垫,采用Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养兔ADSCs,观察细胞形态特征。2取第3代兔ADSCs进行成脂、成骨诱导分化,油红O、茜素红染色鉴定,确定兔ADSCs具备多向分化潜能。3新西兰大白兔心脏抽血,二次离心法制备PRP,血小板计数。4MTT法检测PRP、全血浆、对照组在不同时段(24h、48h、72h)对体外培养兔ADSCs的增殖的影响。5制备脂肪颗粒、明胶海绵颗粒。28只裸鼠随机编号,按随机表将其分成4组,每组7只。每只鼠后背取5点:左上、右上、左下、右下、正中(每两点间距大于2cm),将5点按照随机表排列。体内实验分为五组:①脂肪颗粒+ADSCs+PRP+明胶海绵;②脂肪颗粒+ADSCs+生理盐水+明胶海绵;③脂肪颗粒+PRP+生理盐水+明胶海绵;④脂肪颗粒+全血浆+生理盐水+明胶海绵;⑤脂肪颗粒+生理盐水+明胶海绵。将各组移植入裸鼠皮下。6分别于7d、14d、30d、90d取材,制作石蜡切片,HE染色法观察对比组织形态,免疫组化法检测血管数。结果:1ADSCs原代培养的细胞接种24h后,可见少量较大的椭圆形、类圆形细胞贴壁,未贴壁的细胞大部分为圆形的红细胞及筋膜杂质。48h后首次换液,大多数细胞贴壁,呈梭形、多角形、类圆形等。3d后可见部分细胞已贴壁伸展,呈长梭形,核居中、可见核分裂相。7d后可见细胞80%-90%融合,细胞呈长梭形成纤维细胞样生长,集体呈旋涡状、鱼群状生长。此时进行胰酶消化传代,4-6h即可贴壁,细胞形态仍呈长梭形,且贴壁速度和生长速度较原代细胞明显增快,连续传代19代细胞形态无明显改变。成脂诱导2W后油红O染色呈阳性结果,成骨诱导3W后茜素红染色呈阳性结果,对照组均为阴性结果。2全血血小板计数结果:(330.2±148.8)×109/L, PRP血小板计数结果:(1398.3±888.5)×109/L,PRP血小板计数是全血的4.23倍。3细胞增殖实验MTT法显示PRP组在24h、48h、72h时对ADSCs的增值较对照组增殖明显,与全血浆组有统计学差异(p≤0.05)。4与其他各组相比,各时间段内脂肪颗粒+ADSCs+PRP+明胶海绵组血管数均明显增多,单独ADSCs或PRP组相对较多,全血浆组、生理盐水组血管数最少。结论:ADSCs与PRP联合可促进脂肪颗粒移植中的血管生成。