Ⅰ型鸭病毒性肝炎SG株的致病性研究及全基因组序列测定与分析

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鸭Ⅰ型病毒性肝炎(Duck viral hepatitis,DVH-Ⅰ)是由Ⅰ型鸭肝炎病毒引起的雏鸭高度致死性、传播性的病毒性疾病,主要侵害6周龄以内雏鸭,以2日龄至3周龄的雏鸭最为易感,成年鸭有抵抗力。DHV有Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,其中Ⅰ型和Ⅲ型属于小RNA病毒科,Ⅱ型属于星状病毒科。我国主要流行的是Ⅰ型鸭肝炎病毒,该病是养鸭业的主要疾病之一,给养鸭业带来了巨大的经济损失。本研究主要包括以下内容:1、对山东寿光地区的疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,通过鸭胚尿囊腔接种分毒、血凝实验、标准血清中和实验、动物回归实验以及RT-PCR检测对病毒进行鉴定,并在此基础上对该病毒的ELD50和LD50进行了测定。结果表明所分离病毒无血凝性,人工感染12日龄鸭胚和7日龄雏鸭后表现出典型的鸭肝炎病毒致病特征,能被DHV-Ⅰ标准抗血清中和,RT-PCR检测及序列测定为传统的DHV-Ⅰ,其第5代病毒尿囊液对12日龄鸭胚的ELD50为10– 5.58/ 0.2ml,对7日龄雏鸭的LD50为10–4.68/ 0.2ml。实验结果表明本研究在山东寿光地区成功分离到一株传统Ⅰ型鸭肝炎病毒强毒,命名为SG株DHV-Ⅰ。2、根据已经发表的DVH-Ⅰ的全基因组序列,本研究设计了9对特异性引物对SG株DVH-Ⅰ全基因组进行扩增及克隆测序,序列拼接后,进行BLAST在线同源比较,确定为Ⅰ型鸭肝炎病毒序列,并提交GenBank,登录号为FJ971623。测序结果显示SG株DVH-Ⅰ基因组全长7690bp(3’端ploy(A)尾巴除外),基因组结构为5’UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3’UTR,包含一个全长6750bp大的ORF,编码2249个氨基酸长的多聚蛋白(Polyprotein),具有与小RNA病毒科其他成员相似的切割位点,且被切割成11个终蛋白产物。将所获得的SG株DHV-Ⅰ的全基因组核苷酸序列、Polyprotein氨基酸序列、VP1氨基酸序列、P1核苷酸序列以及3D氨基酸序列分别与GenBank中另外30株DHV的相应序列进行了进化树分析,结果表明在各种进化树中,SG株DHV-Ⅰ均与其他传统DHV-Ⅰ毒株在同一进化分支上,而与DHV-Ⅰ变异株的进化分支距离较远,表明其为传统的DHV-Ⅰ,这与试验一的研究结果是一致的。本研究为进一步深入开展山东省寿光地区DHV的流行病学研究及科学防控DVH奠定了基础。
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