视蛋白3在人结节型基底细胞癌中的表达及功能研究

来源 :贵州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:anknn21
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目的:探索视蛋白3在人结节型基底细胞癌癌组织及癌旁组织的表达及差异,以及视蛋白3对基底细胞癌细胞增殖、迁移和凋亡的调节作用及相关分子调控机制。方法:1.收集贵州医科大学附属医院经皮肤镜、皮肤CT(皮肤反射式共聚焦显微成像,Reflectance confocal microscopy,RCM)检查、病理活检确诊的31例头面部结节型基底细胞癌患者的临床资料及临床组织样品(癌组织及癌旁正常组织(Paired adjacent normal skin tissues,PANST))。利用免疫荧光染色法、蛋白印迹法(Western-blot,WB)和实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)检测视蛋白3(Opsin3,OPN3)在癌组织及癌旁正常组织中表达的情况。2.利用小干扰RNA技术下调基底细胞癌细胞(TE354T)中的OPN3,并将细胞分为三组:对照组(Control)、空载组(RNAi-NC)、视蛋白3敲低组(RNAi-OPN3)。首先通过RT-q PCR和WB实验验证si RNA是否沉默OPN3成功,沉默成功之后,对三组细胞分别进行Cell Counting Kit(CCK-8)实验检验基底细胞癌细胞的增殖活性,Transwell迁移实验以及细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,最后用Western-blot检测视蛋白3下游钙离子信号通路相关蛋白的表达情况。结果:1.结节型基底细胞癌在皮肤镜下见出血,亮红色分枝状血管,周边见蓝灰色卵圆形巢。皮肤CT在Z扫描下见真皮内细胞增生,轮辐状肿瘤团块和栅栏状结构,部分见噬色素细胞聚集;XY扫描见表皮细胞排列紊乱,表皮突消失,见肿瘤团块。病理HE染色提示真皮层见异型性、大小较一致的基底细胞组成,中心部细胞排列紊乱,肿瘤细胞周边的细胞呈栅栏状排列。免疫荧光染色发现OPN3在癌组织中广泛分布,Western-blot及RT-q PCR实验显示与癌旁组织相比,在癌组织中OPN3表达量较高。2.沉默OPN3后,通过CCK-8实验检测TE354T细胞增殖活性,发现视蛋白敲低组与对照组相比,其抑制率随时间的增长而增高。接下来通过Transwell迁移实验以及细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,发现OPN3敲低组与对照组相比,细胞迁移能力明显降低(P<0.05),流式细胞术结果显示沉默OPN3可促进细胞凋亡(P<0.05)。最后通过Western-blot实验检验OPN3下游信号通路相关蛋白的表达情况,发现OPN3敲低组与对照组相比,参与钙通道相关蛋白p-CREB,p-CAMKⅡ表达下降。结论:OPN3在人结节型基底细胞癌癌组织的表达高于癌旁组织,并且可能是通过钙依赖G蛋白偶联受体信号通路调控基底细胞癌细胞增殖、迁移以及凋亡能力。
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