论文部分内容阅读
背景与目的:肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占85%。近年来,随着对肿瘤发生机制研究的不断深入,肿瘤驱动基因的不断发现,特异性高、毒副反应低的分子靶向治疗也越来越多地受到人们的关注。棘皮动物微管相关蛋白4(echinoderm microtubule associaed protein-link 4,EML4)与间变淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)融合基因是由ALK基因的3’端与EML4基因的5’端倒位融合而成的。EML4-ALK融合过程中,使ALK的膜内酪氨酸激酶区不依赖配体而激活,从而Ras/MEK/ERK、PI3K/AKT和JAK3/STAT3等下游信号通路被激活,正常细胞异常增殖,发生癌变。最近EML4-ALK融合基因也成为NSCLC靶向治疗的一个新的重要分子靶点。NSCLC中EML4-ALK融合基因的发生率仅为2%-11.6%,其患者的临床特征和组织病理学亚型仍不十分明确。因此我们希望通过分析NSCLC人群中EML4-ALK融合基因的出现情况及该人群的临床病理特征,对以EML4-ALK融合基因为靶点的分子靶向药物在临床的应用提供帮助。EGFR基因突变是NSCLC发生与演进过程中一个重要的分子变异。一般认为,EML4-ALK融合基因与EGFR突变是相互独立的分子变异。然而,最近在国内外的杂志中出现了 EML4-ALK融合基因与EGFR突变在NSCLC患者的肿瘤组织中共存的相关病例报道。因此,了解这类共存病例的发生概率和临床病理特征是值得关注和探讨的。本研究通过检测NSCLC肿瘤组织中EML4-ALK融合基因的表达情况和黏液性质,进而分析EML4-ALK融合基因阳性患者的临床特征和组织病理形态及其与EGFR第21外显子突变状态的关系,探讨临床病理特征在筛选EML4-ALK融合基因阳性患者中的作用,为今后快速筛选发生EML4-ALK重排的潜在人群及实现以基因分型为基础的NSCLC个体化分子靶向治疗提供理论依据和参考。方法:1、收集本课题组2013年完成EGFR第21外显子突变检测的NSCLC病例98例,这些病例均来自大连医科大学附属医院2007年-2009年未经放疗和化疗的NSCLC手术切除标本。2、应用免疫组织化学方法检测了 NSCLC肿瘤组织中EML4-ALK融合基因蛋白的表达情况,分析了 EML4-ALK融合基因阳性患者的临床病理特征 3、应用AB-PAS特殊染色法对NSCLC标本进行染色,分析了EML4-ALK融合基因阳性的NSCLC肿瘤组织中的黏液性质。4、应用免疫组织化学法检测了 EGFR第21外显子的突变蛋白,以确定EGFR第21外显子是否突变,并对EGFR第21外显子突变结果用基因检测方法进行了验证,分析了 EML4-ALK融合基因阳性患者的EGFR第21外显子突变情况,并对EML4-ALK融合基因与EGFR第21外显子突变共存病例的临床病理特征进行了总结。结果:一、NSCLC肿瘤组织中EML4-ALK融合基因蛋白的表达与临床病理特征间的关系EML4-ALK融合基因蛋白阳性率为30.61%(30/98)。EML4-ALK融合基因蛋白阳性表达例中,男性患者阳性率为16.36%(9/54),女性患者阳性率为47.73%(21/44),两者之间差异显著(P<0.05);腺癌患者阳性率为39.06%(25/64),鳞癌患者阳性率为14.29%(4/28),两者之间差异显著(P<0.05);其表达与患者年龄、吸烟史、肿瘤淋巴结转移、分化程度均无显著相关关系(P>0.05)。二、肺腺癌肿瘤组织中EML4-ALK融合基因蛋白表达与组织学特征之间的关系EML4-ALK融合基因蛋白阳性表达例中,腺泡为主型腺癌患者阳性率为39.58%(19/48),乳头为主型腺癌患者阳性率为50.00%(3/6),其他类型腺癌患者阳性率为30.00%(3/10)。EML4-ALK融合基因蛋白阳性表达在肺腺癌各组织病理学亚型之间无显著差异(P>0.05)。三、NSCLC肿瘤组织中EML4-ALK融合基因蛋白表达与黏液分泌的关系在AB-PAS染色的NSCLC 80例中,EML4-ALK融合基因阳性的NSCLC患者肿瘤组织中有粘液分泌者占79.16%(19/24),EML4-ALK融合基因阴性的NSCLC患者肿瘤组织中有粘液分泌占25.00%(14/56),两者之间差异显著(P<0.05)。四、NSCLC肿瘤组织中EML4-ALK融合基因蛋白表达与EGFR第21外显子突变的关系(一)基因检测法和IHC检出EGFR 21外显子突变均阳性者13例,均阴性者55例,基因检测法阳性而IHC阴性者8例,IHC阳性而基因检测法阴性者22例,两种方法的结果存在关联性,差异有统计学意义(r=0.345,P<0.05)。(二)EML4-ALK融合基因阳性患者的EGFR 21外显子突变率为16.67%(5/30),EML4-ALK融合基因阴性患者的EGFR 21外显子突变为29.41%(20/68),即EML4-ALK融合基因阳性组中携带EGFR21外显子突变的患者低于EML4-ALK融合基因阴性组,但没有统计学意义(p>0.05)。(三)EML4-ALK融合基因EGFR 21外显子双突变的NSCLC患者均为女性,不吸烟,以腺泡为主型的高中分化腺癌,其中进行了 AB-PAS染色的4例患者均分泌不同程度的细胞内和细胞外酸性黏液。结论:1.EML4-ALK融合基因在NSCLC患者中有表达,且多见于女性、腺癌患者。EML4-ALK融合基因和EGFR第21外显子突变具有相似的临床病理特征。2.EML4-ALK融合基因阳性的NSCLC肿瘤组织中分泌不同程度的细胞内和(或)细胞外酸性黏液。3.EML4-ALK融合基因阳性患者多不携带EGFR第21外显子突变,同时发现EML4-ALK融合基因与EGFR第21外显子突变有共存现象。4.EML4-ALK融合基因蛋白阳性表达并携带EGFR 21外显子突变的NSCLC患者均为女性,不吸烟,以腺泡为主型的高中分化腺癌,且分泌酸性黏液。