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猪的传染病日益复杂,需要接种的疫苗的种类也日益增多,反复免疫接种将造成动物的应激反应,并影响生产性能,而且加大了生产成本。因此,迫切需要研究开发多联疫苗,以达到一针防多病的目的。多联高效灭活疫苗的生产的关键技术是抗原成份的合理、有效地配合。针对种猪病毒性繁殖障碍病原种类较多,且混合感染多发的特点,本试验探讨了制备猪细小病毒病/伪狂犬病/猪繁殖与呼吸综合征(PP/PR/PRRS)这3种目前主要引起种猪繁殖障碍疾病的三联浓缩灭活疫苗的有关技术。 首先探讨了猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)增殖的6个影响因素,包括细胞系(PK-15、ST、Marc-145、RK、BHK-21)选择、最佳培养基、收毒时间、冻融次数等。试验表明,PPV用ST或PK-15细胞,以含10%犊牛血清、pH7.0的MEM或TC199营养液,毒价最高。最佳收毒时间为72h;最佳冻融次数为3次。PRV最适宜RK细胞、在含8-10%犊牛血清、pH7.0-7.2的DMEM中增殖,其最适收毒时间为48-60h;最佳冻融次数2次。 用细胞感染法检测灭活效果,在37℃下,用0.1%甲醛灭活,至规定的时间,用焦亚硫酸钠终止其灭活,观察是否出现CPE。PPV、PRV及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)细胞培养液被完全灭活的时间分别为48h、24h及24h。 用PEG20000将PPV、PRV及PRRSV灭活的细胞培养液浓缩3倍,并制成三联油乳剂灭活浓缩疫苗。取PPV、PRV及PRRSV抗体检测阴性的后备母猪23头分成5组,用此三联苗及各自的单苗进行免疫接种,结果表明,免疫4个月内,PP/PR/PRRS三联疫苗免疫猪产生的针对各病毒的抗体滴度与相应各单苗相当(p0.05),表明PP/PR/PRRS三联疫苗之间没有干扰现象。用四个批次的三联苗对20头初生仔猪和12头妊娠80d的母猪进行安全试验表明,2倍常规免疫剂量的联苗对仔猪和4倍常规免疫剂量对母猪是安全的。用4个批次的三联疫苗对514头生产母猪进行田间免疫试验,试验组窝均活仔数9.725头比对照组7.12头提高了2.605头;死仔数由对照组的13.8%下降到3二55%,差异均极显著(P<o刀1)。上述结果显示,三联疫苗用于田间试验安全有效。