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目的 通过设置不同给药天数和日给药次数制备真武汤含药血清,作用于NRK-52E细胞,观察其单独作用及与dDAVP合用对“AVP-V2R-AQP2”通路不同环节相关蛋白表达的影响,探讨真武汤对该通路的调控作用,初步揭示真武汤调节水分转运平衡的部分分子机制。方法 取SPF级雄性SD大鼠48只,随机分成8组,每组6只。分别为C1d2组(蒸馏水,2次/天,1天)、Zld2组(真武汤,2次/日,1天)、C3d2组(蒸馏水,2次/天,3天)、Z3d2组(真武汤,2次/天,3天)、C5d2组(蒸馏水,2次/天,5天)、Z5d2组(真武汤,2次/天,5天)、C7d2组(蒸馏水,2次/天,7天)、Z7d2组(真武汤,2次/天,7天)。各组灌胃给予蒸馏水或真武汤22.68g/(kgd)(按生药量计)。末次给药前禁食不禁水12h。末次给药后1 h,腹腔注射0.3%的戊巴比妥钠麻醉,进行心脏采血,3000rpm离心分离制备含药血清。体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,给予不同给药方案制备的真武汤含药血清和dDAVP,采用细胞免疫荧光法对NRK-52E细胞中的V2R和AQP2的分布进行定位;通过Western blot法检测NRK-52E细胞中V2R、AQP2、AQP3、AQP4等相关蛋白的表达,荧光定量PCR法检测AQP2、AQP3、AQP4的mRNA水平。结果(1)梯度浓度的dDAVP分别作用于NRK-52E细胞1 h和24 h,与空白对照组比较,10-7M dDAVP可显著减少V2R的蛋白表达量、增加AQP2的蛋白表达量。10-7M dDAVP作用于NRK-52E细胞0-60 min,结果显示,30 min后可使AQP2,可显著提高AQP2、AQP3的蛋白表达量。(2)不同给药天数和日给药次数所制备的真武汤含药血清作用于NRK-52E细胞24h,与空白对照组比较,正常大鼠血清对蛋白表达无显著影响;与正常大鼠血清比较,每天给药2次连续给药7天制备的真武汤含药血清可显著增加AQP2、AQP3、AQP4的mRNA水平及V2R、AQP2、AQP3的蛋白表达量。(3)每天给药2次连续给药7天制备的真武汤含药血清与dDAVP合用,可显著增加NRK-52E细胞膜V2R的蛋白表达量及AQP2、AQP3的蛋白表达量,作用较单独给予真武汤含药血清强。结论dDAVP作用于NRK-52E细胞,使AQP2蛋白表达量发生显著变化的最佳浓度和时间分别为10-7M、30min;每天给药2次、连续给药7天为较为适宜的真武汤含药血清的制备方法;真武汤含药血清能上调NRK-52E细胞“AVP-V2R-AQP2”通路上AQPs的mRNA水平和V2R、AQPs的蛋白表达量,且与dDAVP合用存在协同效应,提示真武汤调节水分转运平衡、纠正水液代谢紊乱可能与“AVP-V2R-AQP2”通路有关。