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以花生(Arachis hypogaeaL.)汕油523种子为材料,用植物组织捣碎机捣碎,正己烷脱脂得花生脱脂粉,硫酸铵分级沉淀法提取得花生种子伴花生球蛋白Ⅱ(ConⅡ),ConⅡ在脱脂粉中的得率约为5.01%。Sepharose4B柱层析分离纯化ConⅡ得两个蛋白组分p1、p2蛋白,其得率分别约为70.25%和1.88%,说明ConⅡ中的主要蛋白组成成分是p1蛋白。SDS-PAGE和Native-PAGE鉴定ConⅡ及p1、p2蛋白组成成分,结果显示ConⅡ由分子量范围为7~100kD蛋白组成;而其组分p1蛋白主要为30kD~100kD范围的高分子量蛋白,p2蛋白为7~22kD及40、64kD处的低分子量蛋白。 小鼠脾脏淋巴细胞转化实验表明,ConⅡ在没有伴刀豆球蛋白A(ConA)或脂多糖(LPS)等丝裂原刺激剂时体外对小鼠脾脏淋巴细胞具有刺激增殖作用,说明ConⅡ具有刺激小鼠脾脏细胞增殖活性;但ConⅡ对丝裂原conA、LPS诱导的淋巴细胞增殖在高浓度时表现出抑制作用,可能是由于蛋白与丝裂原的相互结合作用影响活性有关。而其组分p1蛋白对小鼠淋巴细胞表现出刺激增殖作用,同时对ConA诱导的T淋巴细胞增殖具有促进作用,但对LPS诱导的B淋巴细胞增殖无影响;p2蛋白对小鼠脾脏淋巴细胞及有丝分裂原ConA、LPS诱导的脾脏T、B淋巴细胞增殖都具有抑制作用。结果说明p1蛋白是ConⅡ中增强小鼠淋巴细胞转化功能的主要蛋白组分。 MTT法检测ConⅡ及p1、p2蛋白对单核巨噬细胞Raw264.7增殖的影响,发现ConⅡ及其组分p1蛋白对Raw264.7具有刺激增殖的作用,p2蛋白在一定范围内能刺激增殖,但高浓度时表现出抑制作用;中性红实验发现ConⅡ及p1蛋白在一定浓度范围内能明显增强Raw264.7细胞的吞噬中性红能力,而p2蛋白对Raw264.7细胞的吞噬中性红能力具有抑制作用;Griess试剂法检测ConⅡ对Raw264.7细胞分泌NO的影响,发现ConⅡ及蛋白组分p1、p2蛋白在一定浓度范围内都能增强Raw264.7细胞分泌NO。巨噬细胞功能检测实验说明,ConⅡ能通过刺激巨噬细胞增殖、增强巨噬细胞吞噬功能、刺激其分泌NO等方式,从而调节巨噬细胞的免疫功能,且其中主要作用为p1蛋白,而p2蛋白仅对巨噬细胞部分功能具有增强作用,对部分功能还表现出抑制作用。 100mg/kg·bw环磷酰胺腹腔注射小鼠制作免疫模型小鼠,不同剂量(低剂量:30mg/kg·bw、中剂量:150mg/kg·bw、高剂量:750mg/kg·bw)的ConⅡ灌胃处理小鼠,进行小鼠体内免疫调节作用实验,定期测定小鼠摄食量、体重,脾脏和胸腺质量,计算脾脏和胸腺指数。结果表明低剂量ConⅡ处理对小鼠体重和摄食量无明显影响,中剂量ConⅡ处理能一定程度促进健康及免疫抑制小鼠的生长,而高剂量ConⅡ处理会明显抑制小鼠饮食量和生长,这可能与其中的抗营养因子蛋白酶抑制剂剂量达到一定量有关;低剂量和高剂量ConⅡ处理对小鼠的脾脏和胸腺指数无明显影响,中剂量ConⅡ处理小鼠能一定程度恢复免疫抑制小鼠的免疫器官指数。结果说明ConⅡ对小鼠生长具有一定的调节作用,并具有一定体内免疫增强功能。