唾液酸结合凝集素和C型凝集素的活性比较研究

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抗菌肽具有广谱高效的杀菌能力,是代替传统杀菌药物抗生素的优秀选择。而凝集素作为抗菌肽中一类重要的免疫糖蛋白,在调节细胞先天性和获得性免疫系统功能中发挥了关键的作用。本研究从已发现的一种唾液酸结合凝集素和一种C型凝集素入手,通过构建原核表达载体得到了唾液酸结合凝集素重组蛋白rVpSabl以及C型凝集素重组蛋白rVpCTL,并对两种蛋白的活性进行了研究,结果如下:通过病原体相关分子模式(PAMP)活性结合实验发现,rVpSabl在体外对脂多糖(Lipopolysaccharide)、肽聚糖(Peptidoglycan)、葡聚糖(Glucan)和酵母多糖(Zymosan)具有明显的结合活性;rVpCTL在体外对脂多糖和酵母多糖具有明显结合活性,但对肽聚糖和葡聚糖在低浓度时没有结合活性。通过细菌凝集活性实验发现,rVpSabl能够对大肠杆菌、副溶血性弧菌、哈维氏弧菌、金黄色葡萄球菌、假恶臭单胞菌、奇异变形杆菌、毕赤酵母菌等有明显的细菌凝集活性;rVpCTL能够对大肠杆菌、副溶血性弧菌、哈维氏弧菌、金黄色葡萄球菌以及毕赤酵母菌等有明显的细菌凝集活性,但对假恶臭单胞菌、奇异变形杆菌无明显凝集作用。两种凝集素蛋白均展现出广泛的识别结合能力。在吞噬实验中,rVpSabl和rVpCTL均增强了血细胞的吞噬能力,证明了两种凝集素蛋白都具有良好的抗菌能力。免疫组化实验表明,VpSabl主要在菲律宾蛤仔的肝胰腺、鳃、外套膜中表达。在肝胰腺中表达显著,分布较广,在鳃中也有明显表达,在外套膜中含量最高,足中分布均匀但含量偏低。Vp CTL在肝胰腺、鳃、外套膜和足中皆有表达,在肝胰腺中表达显著且分布广泛,鳃组织中部亦有明显的表达,外套膜中分布较广但含量较少,足中分布均匀但含量偏低。两种凝集素在实验结果中的相同部分表明,唾液酸结合凝集素和C型凝集素既有凝集素的共性,是先天免疫系统的重要组成部分,具有广泛的PAMPs结合活性和细菌凝集特性。而实验结果中两种凝集素表达的差别表明,唾液酸结合凝集素和C型凝集素在组织分布中存在差异以及识别结构域存在不同。
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