首先,研究者采用酸处理Sepharose亲和柱分离纯化竹青蛇毒凝集素蛋白(TSL),并用C8-HPLC反相柱进一步纯化TSL.根据N端氨基酸序列结果,设计简并引物对逆转录产物cDNA进行"巢式"PCR扩增.通过cDNA测序,逆推得到TSL成熟蛋白序列.同时,研究者还利用锚式PCR(LA-PCR)技术克隆了mRNA的5端信号肽和非编码区序列.另外,研究者也利用液相色谱-电喷雾质谱联用分析蛋白酶酶解产物,验证了逆推得到蛋质序列的正确性.以上序列结果已收录入Genebank库,序列号为AF119097.进一步,利用糖苷水解酶结合质谱分析及N端测序 ,得到了第一个蛇毒凝集素的糖链结构信息;并且发现Met-10为氧化形成.TSL是一个含有 丰富二硫键的蛋白质,研究者通过蛋白质的体外变复性,在大肠杆菌中表达了成熟型的TSL 蛋白.质谱分析验证了表达序列的正确性.结合该蛋白质的血凝和酶联集素结测定,表明研究者已得到了有糖结合活性的表达TSL.利用荧光和园二色性分析纯化得到的表达蛋白质和 天然蛋白质,证明了表达与天然的TSL有相似的空间构象.在上述工作基础上,研究者将TSL的氨基序列与其它C型动物凝集素序列进行多重匹配比较;并利用PHD和Predator两软件预测其二级结构,得到相似的结果.进而以PDB库中同源蛋白为晶体模型,模建了TSL立体结构.荧光和圆二色谱的分析结果,进一步表明TSL模建结果是可信的.