目的:复杂性腹腔内感染(complicated Intra-abdominal Infections,c IAI)是临床中较为常见感染之一,c IAI一般发生于腹腔内部、腹腔脏器及腹膜之后。c IAI多数情况为混合细菌感染,感染源包括革兰氏阴性需氧、厌氧杆菌,革兰氏阳性需氧、厌氧球菌等,需广谱抗生素或多种抗生素联合。替加环素为米诺环素的衍生物,替加环素抗菌谱较广,替加环素治疗c IAI疗效肯定,为临床一线药物。本研究收集了安徽医科大学第二附属医院ICU科室2015年6月~2017年6月期间收治的24例c IAI患者相关标本,同时收集了安徽医科大学第二附属医院体检中心15例健康志愿者相关标本,观察比较替加环素对c IAI患者的治疗作用。在观察替加环素对c IAI患者发挥抗感染作用的同时,进一步研究替加环素对c IAI患者体内外免疫功能的影响,为深入研究替加环素抗感染药理作用提供一定的实验依据。目的:研究替加环素对复杂性腹腔感染患者的治疗效果及其对免疫功能的影响。方法:1.c IAI诊断标准具有c IAI手术指征(剖腹手术、腹腔镜手术或经皮引流脓肿手术),二次手术或影像学证明具有至少一项以下诊断:胆囊炎伴有破裂或穿孔、憩室性疾病伴有穿孔和脓肿、阑尾穿孔或阑尾周围脓肿、急性胃或十二指肠穿孔、肠外伤性穿孔、内脏穿孔引起的腹膜炎、手术后腹膜炎、腹腔脓肿等。排除标准如下:腹壁脓肿、小肠梗阻、女性生殖道感染;纳入研究前72 h内接受其它系统抗生素治疗;患者伴有血细胞低比容水平(<25%)、血小板计数低于75 000/mm3或中性粒细胞计数低于1 000/mm3以及其它危及生命疾病(急性肝衰竭和肝疾病);因腹腔感染具有抗生素使用史的患者。2.治疗方案和疗效评价c IAI患者治疗方案如下:替加环素(辉瑞制药公司泰格,批号:H20143394)首次治疗剂量100 mg,维持剂量50 mg/每12 h,静脉滴注,治疗时间7~14 d。患者治疗后临床症状体征消失,实验室检查及细菌学检查结果均为阴性为显著性有效;患者治疗后临床症状体征基本消失或者显著改善,且实验室检查及细菌学检查结果部分改善记为有效;患者治疗前后临床症状体征、实验室检查及细菌学检查结果无明显变化为无效。同时VITEK-2型全自动微生物分析系统(法国梅里埃生物公司)对腹腔感染标本分离的病原体进行鉴定。3.PBMC制备及增殖水平在替加环素干预前及干预后采用梯度离心法制备c IAI患者和健康志愿者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),将上述细胞按照1×105个/每孔接种于96孔板中,每孔终体积200μl。实验分组如下:正常组、模型组、1 mg/L、2mg/L和5 mg/L替加环素组,其中,除正常组外,各组均用100μg/L金黄色葡萄球菌肠毒素A刺激24 h。实验结束前4 h,加入100μl MTT溶液(5 g/L)继续培养4 h,终止培养,采用酶标仪(美国Bio Tek公司)检测各孔吸光度值(A570 nm)。4.细胞因子水平检测取健康志愿者、治疗前以及治疗后c IAI患者外周血3 ml,分离血清,同前法制备PBMC细胞。白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、IL-6和IL-8的水平检测参照美国RD Systems公司酶联免疫试剂盒说明书步骤进行。5.降钙素原,C-反应蛋白,血常规指标检测取健康志愿者、治疗前以及治疗后c IAI患者外周血5 ml,分离血清。按照降钙素原电化学发光法定量检测试剂盒操作步骤,在Modular PPI全自动生化分析仪中检测降钙素原水平。按照C反应蛋白诊断试剂盒操作步骤,在Modular PPI全自动生化分析仪中检测C反应蛋白水平。按照XE5000全自动血球分析仪操作步骤检测患者外周血中白细胞和中性粒细胞水平。6.PBMC T亚群细胞水平检测分别在治疗前和治疗后抽取健康志愿者、治疗前以及治疗后的c IAI患者外周血2ml,加入抗凝剂EDTA。取100μl抗凝血加入流式管,加入荧光标记的抗体10μl染色混匀,包括CD3+、CD4+、CD8+抗体(美国Santa Cruz公司)。室温避光孵育30 min,加入溶血素500μl裂解红细胞,室温避光孵育20 min上流式细胞仪检测。7.统计分析使用SPSS16.0软件进行分析,计数资料以百分率表示,计量资料以表示,同组样本资料治疗前后免疫水平对比采用配对样本t检验,两组间免疫水平对比采用独立样本t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1.替加环素有效抑制cIAI患者腹腔感染替加环素对cIAI患者总有效率为70.8%(显效率45.80%+有效率25.0%),无效率为29.2%。替加环素对病原微生物抑制率依次为70.6%(大肠杆菌)、42.9%(阴沟肠杆菌)、55.6%(鲍氏不动杆菌)、75.0%(梭状芽孢杆菌)、72.7%(消化链球菌)、77.8%(肠球菌)、60.0%(金黄色葡萄球菌)、72.7%(咽峡炎链球菌)、55.6%(奇异变形菌)、83.3%(肺炎克雷伯菌)。2.替加环素对c IAI患者外周血白细胞和中性粒细胞的作用cIAI患者在使用替加环素治疗前,外周血中的白细胞与中性粒细胞水平与正常组相比显著升高,两者比较其差异具有统计学意义,##P<0.01,c IAI患者在使用替加环素治疗后,外周血中的白细胞与中性粒细胞水平与治疗前相比显著降低,两者比较其差异具有统计学意义,**P<0.01。3.替加环素对c IAI患者c反应蛋白和降钙素原的作用c IAI患者在使用替加环素治疗前,外周血中的c反应蛋白和降钙素原与正常组相比显著升高,两者比较其差异具有统计学意义,##P<0.01,c IAI患者在使用替加环素治疗后,外周血中的c反应蛋白和降钙素原水平与治疗前相比显著降低,两者比较其差异具有统计学意义,**P<0.01。4.替加环素降低c IAI患者血清和PBMC炎性细胞因子的水平与正常组比较c IAI患者在使用替加环素治疗前血清炎性细胞因子IL-1β、IL-6和IL-8含量水平明显较高两者比较其差异具有统计学意义,##P<0.01;c IAI患者在使用替加环素治疗后与治疗前相比较,c IAI患者治疗后IL-1β、IL-6和IL-8含量水平显著降低,两者比较其差异具有统计学意义,**P<0.01。此外,体外制备PBMC细胞,采用SEA刺激可显著提高细胞分泌IL-1β、IL-6和IL-8的水平两者比较其差异具有统计学意义,##P<0.01,替加环素体外给药能够显著降低PBMC上清液中IL-1β、IL-6和IL-8的含量水平,两者比较其差异具有统计学意义,**P<0.01,提示替加环素直接降低炎性细胞因子水平。5.替加环素降低c IAI患者PBMC增殖水平结果表明,与正常对照组PBMC比较,SEA体外刺激能够明显增加PBMC的增殖水平,两者比较其差异具有统计学意义,##P<0.01。替加环素体外给药能显著降低SEA刺激下PBMC的增殖水平,两者比较其差异具有统计学意义,**P<0.01,结果提示替加环素对SEA激活的PBMC增殖反应具有直接的抑制作用。6.替加环素调节c IAI患者外周血CD3、CD4和CD8的表达水平与正常对照组比较,c IAI患者治疗前外周血CD3+、CD4+百分比明显降低,CD4+/CD8+比值明显降低,CD8+百分比明显升高,两者比较其差异具有统计学意义,P<0.01;与c IAI患者治疗前比较,替加环素治疗后可显著提高外周血CD3+、CD4+百分比和CD4+/CD8+比值,并同时降低CD8+百分比两者比较其差异具有统计学意义,P<0.01,提示替加环素对c IAI患者的体内免疫失衡存在一定的调节作用。结论:1.替加环素对c IAI患者的感染具有治疗作用。2.替加环素在发挥本研究显示抗感染作用的同时,可体内外作用c IAI患者免疫细胞,可调控机体内免疫失衡。