目的:胃癌是中国常见的一种恶性肿瘤,在癌症引起的死亡原因中位列第二,在东亚地区的发病率占一半以上。由于绝大部分患者在就诊时就已经发展为进展期胃癌,即使现在针对胃癌的微创手术已经发展地较为完善,但是患者的预后结果还未能达到预期。并且由于胃癌细胞所具有的异质性,故关于胃癌的发生发展机制还未能完全研究透彻。CDK5RAP3蛋白是一种可以与CDK5激活蛋白P35、P39结合的蛋白。在先前的研究中,CDK5RAP3已经被证实在胃癌组织中的表达呈下调趋势,并且与不良预后相关,而且CDK5RAP3也被证实可以通过对GSK-3β的Ser9位点磷酸化来抑制Wnt/β-catenin信号通路。但CDK5RAP3抑制GSK-3β磷酸化的具体机制还尚未被研究。有研究报道称AKT,PKA和PKC等激酶可以通过抑制Ser9位点的磷酸化来调控GSK-3β的磷酸化。本研究首先在胃癌细胞系中研究可能存在的作用关系及作用位点,并探讨CDK5RAP3与AKT相互作用的相关潜在机制。其次,本课题利用体外的分子生物学实验探究CDK5RAP3通过AKT的去磷酸化对胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移造成的影响,并探究产生这些现象可能存在的机制。最后,我们通过分子生物学研究探讨CDK5RAP3调控AKT的去磷酸化在胃癌组织中的表现情况,并通过患者的生存资料和临床病理分析CDK5RAP3调控AKT的去磷酸化对临床患者预后的影响。本研究旨在明确CDK5RAP3调控AKT的去磷酸化在胃癌发展中所发挥的作用和机制,有望能为寻找胃癌的早期及潜在的治疗靶点提供新的理论基础。方法:1.利用包装好的慢病毒构建稳定过表达CDK5RAP3及沉默CDK5RAP3的胃癌细胞株AGS细胞株,并通过Western Blotting检测CDK5RAP3和AKT以及相关蛋白的表达情况。2.通过CO-IP验证CDK5RAP3,AKT和GSK-3β之间是否存在免疫共沉淀作用。3.通过构建稳定沉默CDK5RAP3的胃癌细胞株HGC-27,并利用AKT si RNA沉默AKT的表达,探讨CDK5RAP3通过AKT的介导调控在Wnt通路中的作用机制。4.通过CCK8、细胞计数法及平板克隆形成实验在构建好的稳转胃癌细胞株中探讨CDK5RAP3调控AKT去磷酸化对胃癌细胞增殖产生的影响。5.利用Transwell小室检测CDK5RAP3调控AKT的去磷酸化是否导致胃癌细胞侵袭迁移的改变。6.通过构建CDK5RAP3稳定过表达和沉默的胃癌细胞株HGC-27,NUGC-3和MGC-803,并利用Western Blotting检测分析CDK5RAP3调控AKT的去磷酸化对EMT通路产生的影响。7.采用IHC及Western Blotting检测CDK5RAP3调控AKT的去磷酸化在人体胃癌及癌旁样本中的表现情况,并观察CDK5RAP3对AKT的调控与临床胃癌患者的病理资料以及生存预后的相关性。结果:1.CDK5RAP3在细胞中可以与AKT和GSK-3β产生免疫共沉淀。2.CDK5RAP3通过AKT的Ser473位点去磷酸化来抑制GSK-3β的Ser9位点磷酸化,从而抑制β-catenin的表达。3..CDK5RAP3对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的抑制作用由AKT介导。稳定沉默CDK5RAP3后的胃癌细胞株会出现增殖、侵袭及迁移能力增强的现象,但同时沉默AKT后会出现胃癌细胞株的增殖、侵袭及迁移能力减弱的现象。4.CDK5RAP对EMT信号通路的抑制作用由AKT介导。5.在胃癌组织中,CDK5RAP3低表达的情况下会出现AKT的Ser473位点磷酸化蛋白表达增加,而CDK5RAP3高表达的情况下则相反;6.CDK5RAP3与p-AKT（Ser473）均是影响胃癌患者临床预后的因素,并且CDK5RAP3对患者预后的影响与其调控AKT的Ser473位点去磷酸化作用明显相关。结论:1.CDK5RAP3可以与AKT形成复合物,并使AKT的Ser473位点去磷酸化从而抑制GSK-3β的Ser9位点的磷酸化,最终抑制β-catenin的表达。2.CDK5RAP3通过对AKT的Ser473位点的去磷酸化从而降低胃癌的增殖、侵袭和迁移能力。3.CDK5RAP3与p-AKT（S473）均是影响患者预后的独立危险因素,CDK5RAP3调控AKT的Ser473位点去磷酸化导致对患者预后的影响。