【摘 要】
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目的:探究茵陈四苓颗粒联合骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）移植对急性肝衰竭（Acute Liver Failure,ALF）大鼠肝脏线粒体呼吸链复合物和三磷酸腺苷ATP活性的调控作用。方法:采用茵陈四苓颗粒与BMSCs移植联合方法治疗ALF,检测ALF大鼠肝功能、相关线粒体凋亡蛋白,观察肝脏病理和肝细胞线粒体超微结构,测定呼吸链复
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目的:探究茵陈四苓颗粒联合骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）移植对急性肝衰竭（Acute Liver Failure,ALF）大鼠肝脏线粒体呼吸链复合物和三磷酸腺苷ATP活性的调控作用。方法:采用茵陈四苓颗粒与BMSCs移植联合方法治疗ALF,检测ALF大鼠肝功能、相关线粒体凋亡蛋白,观察肝脏病理和肝细胞线粒体超微结构,测定呼吸链复合物I、II、III和线粒体ATP活力。操作步骤如下:1.提取及鉴定大鼠BMSCs:从SD大鼠腿骨体外分离BMSCs,将细胞进行提纯、培养、传代。传至第3代后用流式细胞仪鉴定细胞表面标志物。2.分组及造模:将60只SD健康雄性大鼠随机等分为正常组、联合组、中药组、干细胞组、对照组、模型组。正常组腹腔注射0.9%Nacl溶液,其余5组腹腔注射硫代乙酰胺（TAA,300mg/kg）构建ALF模型,24h后重复1次。3.干预措施:第2次腹腔注射TAA后,正常组和模型组:灌胃等量0.9%Nacl溶液;中药组:灌胃茵陈四苓颗粒溶液1.5g/kg;对照组:灌胃复方甘草酸苷片溶液7.5mg/kg;干细胞组:尾静脉注射BMSCs悬液（细胞数约1.0×10~6个/m L）;联合组:灌胃茵陈四苓颗粒溶液1.5g/kg+尾静脉注射BMSCs悬液（细胞数约1.0×10~6个/m L）,总共干预48h,q12h干预1次。4.结果检测:干预72h后,检测肝功能（ALT、AST、TBIL）,观察病理形态结构,透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope,TEM）观察肝细胞线粒体超微结构;紫外分光光度计检测呼吸链复合物（I、II、III）活性变化,磷钼酸比色法测定肝脏及肝细胞线粒体ATP含量,Western blot测定凋亡蛋白（Bcl-2和Caspase-3）表达水平。结果:1.成功鉴定大鼠BMSCs:流式细胞仪鉴定第3代细胞表面标志物:CD29/90呈强阳性;CD45/34呈阴性。2.大鼠肝功能结果:干预72h后,与各干预组相比,联合组肝功能（AST、ALT、TBIL）损伤最轻（P＜0.05）。3.大鼠肝细胞线粒体超微结构结果:茵陈四苓颗粒联合BMSCs可以减轻ALF大鼠肝细胞线粒体损伤。4.大鼠肝脏线粒体复合物活力和ATP浓度结果:与模型组相比,联合组大鼠肝脏线粒体提取液中复合物I、III活力及ATP浓度升高,差异显著（P＜0.05）。5.凋亡蛋白Bcl-2、Caspase-3结果:与各干预组相比,联合组Bcl-2蛋白表达平均水平最高（P＜0.05）,Caspase-3蛋白表达平均水平最低（P＜0.05）。结论:1.茵陈四苓颗粒联合BMSCs移植组肝功能损伤最轻。2.茵陈四苓颗粒与BMSCs移植联合法可以提高ALF大鼠存活率,减轻肝细胞和肝细胞线粒体变性坏死程度,抑制肝细胞线粒体损伤。3.茵陈四苓颗粒联合BMSCs移植对ALF大鼠线粒体呼吸链具有调控作用,其机制可能与提高肝细胞线粒体呼吸链复合物（I、II、III）及ATP酶活力、增强线粒体能量代谢、上调凋亡蛋白Bcl-2、抑制Caspase-3水平有关。
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