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目的乳腺癌是女性最常见、多发的肿瘤,呈年轻化发展趋势[1],是女性恶性肿瘤中死亡率最高的疾病[2,3]。DNAJ热休克蛋白40家族成员A1（DNAJ Heat Shock Protein 40 Family Member A1,DNAJA1）基因是我们前期通过基因芯片技术筛选出来与肿瘤增殖、侵袭和转移密切相关的基因[4],且分析TCGA,GTEx等数据库发现DNAJA1在乳腺癌中高表达。p53蛋白,是一种关键的人类肿瘤抑制因子（Tumor Suppressor）,多数人类癌症中发现了TP53抑癌基因突变,突变型p53的特异性稳定促进了肿瘤的发生和发展,且在多种肿瘤中发现其在化疗药物耐药中起作用。研究结果显示,在具有不同突变型p53的多种肿瘤细胞中敲除DNAJA1能诱导C末端Hsc70反应蛋白（Cterminus of Hsc70-interacting protein,CHIP）泛素连接酶（Ubiquitin Ligase）介导的核浆转位,引起错误折叠的突变型p53的泛素化（Ubiquitin）和降解,而过表达DNAJA1则能够阻碍甲戊酸途径（Mevalonate,MVA）介导的突变型p53的降解。本课题通过检测DNAJA1在不同分子分型的乳腺癌中的表达,探讨DNAJA1在乳腺癌中的生物学功能,进一步探讨DNAJA1与突变型p53在乳腺癌增殖、转移及化疗抵抗（Chemotherapy Resistance）中的作用及可能的分子机制,为DNAJA1是否能作为乳腺癌新的分子标志物及药物靶点提供科学依据,对于乳腺癌的诊断、药物治疗及预后具有重要科学依据。方法1.采用免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）技术检测不同分子亚型乳腺癌中DNAJA1的表达情况,分析DNAJA1在癌组织中的表达与p53突变及各临床病理参数的关系。在人乳腺癌细胞MDA-MB-231,HS578T中利用si RNA沉默DNAJA1,利用生物学行为实验检测沉默DNAJA1对其增殖、侵袭能力的影响。采用Western-blot检测沉默DNAJA1对MDA-MB-231,HS578T细胞中上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal Transition,EMT）重要标记物E-cadherin,N-cadherin,Vimentin和干性相关标记物CD133,OCT4的影响。2.IHC检测40例接受相同方案新辅助化疗患者化疗之前穿刺标本癌组织中DNAJA1的表达情况,分析DNAJA1与化疗敏感性的关系。通过TCGA,GTEx数据库预测DNAJA1与TP53的相关性及分析169例石蜡组织中DNAJA1的表达与TP53的相关性。利用GSEA数据库预测DNAJA1相关信号通路,并利用Western-blot检测TP53 R175H对信号通路的影响及利用CCK-8检测其对化疗效果的影响。结果1.DNAJA1在乳腺癌组织中的表达明显高于正常组织,在三阴性乳腺癌组织中的表达明显高于其它分子亚型的乳腺癌组织。DNAJA1表达与p53的突变有关,P＜0.05,而与患者的年龄、肿瘤大小、Ki-67表达、ER表达、PR表达及HER2表达无关,P＞0.05。高表达DNAJA1组患者的生存时间明显短于低表达组,P＜0.05。2.体外功能实验结果显示,DNAJA1促进乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,同时增强了细胞的干性及诱导EMT。3.DNAJA1在Miller-Payne 1级组乳腺癌组织中的表达最高,在Miller-Payne 5级组癌组织中表达最低。CCK-8实验结果显示干扰DNAJA1增强了HS578T对多柔比星（Doxorubicin）的敏感性。4.在伴有p53突变的乳腺癌组织中DNAJA1表达高于其在p53野生型中的表达,且DNAJA1的表达与p53的表达呈正相关（R~2=0.1545,P=0.016）。GSEA数据库分析发现,DNAJA1高表达存在K-RAS信号通路的富集。免疫共沉淀结果显示,与TP53 R273H,TP53 248W相比,DNAJA1与TP53 R175H型存在直接结合。Western-blot结果显示,在HS578T中过表达TP53 R175H并干扰DNAJA1,K-RAS信号通路关键蛋白K-RAS,p-ERK1/2,MAPK的表达水平均明显降低,而野生型p53中未观察到这种变化。在化疗药物多柔比星的作用下,TP53 R175H过表达的HS578T细胞增殖活性下降更慢,同时干扰DNAJA1后,HS578T对多柔比星的敏感性增加。结论1.DNAJA1促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,DNAJA1高表达与患者的不良预后及化疗抵抗有关。2.DNAJA1通过增强干性及诱导EMT增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。3.DNAJA1通过稳定TP53 R175H,减少TP53 R175H的降解,激活K-RAS通路,促进乳腺癌细胞的化疗抵抗。