目的角膜新生血管是多种眼表疾病的常见病理改变,也是导致视力下降甚至失明的因素之一。现阶段用于治疗角膜新生血管的药物虽均有一定成效,但可导致多种不良反应。因此寻找可以有效抑制角膜新生血管,并减少不良反应的药物越来越受到临床关注。本研究应用0.1%溴芬酸钠滴眼液对大鼠角膜碱烧伤新生血管模型进行治疗。观察造模后不同时间各组大鼠角膜及前房临床表现、新生血管面积进展情况、角膜组织病理学改变、炎症反应程度和角膜新生血管相关因子环氧化酶-2(COX-2)及血管内皮生长因子(VEGF)在角膜组织中的表达。探讨0.1%溴芬酸钠滴眼液是否有抑制大鼠角膜新生血管的作用及其机制。方法1.成年雄性SD大鼠通过不同角膜碱烧伤时间建立新生血管模型,造模后每天裂隙灯显微镜观查角膜情况,寻找最佳造模方法。2.角膜碱烧伤法建立大鼠右眼新生血管模型,将模型鼠随机分为模型对照组(A)、磷酸盐缓冲液(PBS)滴眼组(B)、0.1%溴芬酸钠滴眼组(C)和0.1%氟米龙滴眼组(D)。B、C和D组于造模后第1天分别用PBS、0.1%溴芬酸钠滴眼液和0.1%氟米龙滴眼液点眼。正常对照组(E),不作处理,正常饲养。3.造模前及造模后第1、3、7、14、21、28天分别用裂隙灯显微镜采集各组模型鼠右眼(实验眼)前节像,观察角膜及前房临床表现,进行角膜混浊和水肿程度评分,记录并发症发生率。4.计算造模后第1、3、7、14、21、28天各组模型鼠角膜新生血管面积比率。5.造模后第7、14、28天,每组随机过量麻醉法处死3只大鼠,取整个右眼眼球,制备石蜡切片并行HE染色,光镜下观察各组大鼠角膜组织病理学改变。6.各组已制作的大鼠眼球石蜡切片同时行免疫组织化学染色,光镜下观察各组大鼠角膜组织中CD45及VEGF-A的表达情况。7.造模后第7、14、28天,分别取各组大鼠角膜组织,提取总RNA,用于RT-PCR检测角膜组织中COX-2及VEGF mRNA表达情况。8.造模后第7、14、28天,分别取各组大鼠角膜组织,提取角膜总蛋白,用于酶联免疫吸附实验(ELISA)检测角膜组织中COX-2及VEGF蛋白含量。结果1.成功建立大鼠角膜新生血管模型,以45秒碱烧伤为最佳造模方法。2.临床表现及并发症:各组大鼠角膜混浊和水肿程度于造模后7天内持续加重,随后逐渐减轻;A、B组角膜新生血管于造模后第14天生长至角膜中央区,C、D组新生血管仅生长至角膜中周部。造模后第7、14、21、28天,A、B组角膜混浊和水肿程度评分及角膜新生血管面积比率均显著高于C、D组,差异有统计学意义(均P<0.05)。造模后28天内,A组均未见角膜穿孔,前房积血率20%;B、C和D组角膜穿孔率分别为10%、10%和30%,前房积血率分别为20%、30%和10%。3.角膜组织病理学改变:造模后第7天,各组角膜上皮层细胞层数减少、排列不规则,A、B组角膜上皮层和基质层的正常组织学形态明显改变,均严重水肿增厚,纤维皱缩,并可观察到少量炎性细胞浸润;C、D组角膜基质层轻微增厚,水肿较轻。造模后第14、28天,各组角膜上皮角化,基质水肿逐渐减轻,均未见炎性细胞浸润。4.CD45、COX-2及VEGF表达情况:免疫组织化学染色显示,造模后第7天,各组角膜基质层VEGF-A阳性表达,A、B组染色强度强于C、D组,A组及B组可见极少量CD45阳性细胞;造模后第14、28天,各组VEGF-A染色逐渐减弱,未观察到炎性细胞浸润。造模后第7天,A、B组COX-2、VEGF mRNA及蛋白表达量均高于C、D、E组(均P<0.05);造模后第14天,A、B组COX-2、VEGF mRNA及蛋白表达量仍高于E组(均P<0.05),A、D组COX-2蛋白表达量与C组比较,差异有统计学意义(均P<0.05),其余各造模组间结果无统计学差异(均P>0.05)。结论0.1%溴芬酸钠滴眼液可减轻角膜碱烧伤后混浊和水肿程度,抑制角膜新生血管形成,减少角膜组织病理学改变,最终减轻瘢痕程度,达到作用效果。其机制可能是降低COX-2表达,减轻炎症反应程度,抑制VEGF产生,但长期应用后存在一定并发症,可为临床应用提供参考。