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目的:1.建立同时测定人血浆中甘氨酸奥贝胆酸和牛磺酸奥贝胆酸浓度的LC-MS/MS方法,并对该方法进行验证。2.设计合理的临床试验方案,评价美国Intercept Pharmaceuticals制药公司研制的奥贝胆酸片（10 mg/片）与国内某公司研制的奥贝胆酸片（10 mg/片）的药动学和生物等效性。方法:1.人体血浆中甘氨酸奥贝胆酸和牛磺酸奥贝胆酸血药浓度LC-MS/MS测定方法的建立:以格列美脲为内标,用乙腈蛋白沉淀后取上清液氮气吹干25%甲醇水复溶的方法处理血浆样品;采用安捷伦Poroshell 120 EC-C18色谱柱,水相为含0.05%甲酸的水溶液,有机相为100%乙腈,柱温40oC,流速0.4 m L/min,进样量20μL;采用电喷雾离子化负离子模式进行多重反应监测,离子对分别为m/z 476.3→74.1（甘氨酸奥贝胆酸）、m/z 526.3→123.9（牛磺酸奥贝胆酸）、m/z 489.3→224.8（内标）。2.奥贝胆酸片生物等效性研究:采用单中心、随机、开放、两制剂、三周期、三序列、部分重复设计进行空腹和餐后状态下的生物等效性评价。每周期间的清洗期为21天,空腹和餐后条件下,根据受试者入、排标准分别选入48名健康受试者参与试验,随机分为三组,每周期单次口服1片受试制剂或参比制剂（10 mg）。采用LC-MS/MS测定不同时间奥贝胆酸及其活性代谢物的浓度,利用DAS 3.2.5软件计算药动学参数并评价两制剂生物等效性。结果:1.人体血浆中甘氨酸奥贝胆酸和牛磺酸奥贝胆酸的LC-MS/MS测定方法的评价结果:本试验建立了人血浆中甘氨酸奥贝胆酸及牛磺酸奥贝胆酸的LC-MS/MS测定方法,选择性良好,血浆中内源性物质不干扰样品的测定。甘氨酸奥贝胆酸标准曲线线性范围为1.00～120 ng/m L,线性关系良好,回归方程为y=0.022240 x+0.003357（相关系数r2=0.9960）,牛磺酸奥贝胆酸标准曲线线性范围为0.150～18.0ng/m L,线性关系良好,回归方程为y=0.09701 x+0.000923（相关系数r2=0.9955）。高、中、低三个浓度水平的批内、批间精密度偏差均小于8.6%,最低定量下限的批内、批间准确度均小于11.8%,四个浓度水平的批内、批间准确度偏差均在-6.7%～7.2%之间。甘氨酸奥贝胆酸和牛磺酸奥贝胆酸三个浓度水平的回收率准确度均小于7.6%。三个浓度水平下,甘氨酸奥贝胆酸和牛磺酸奥贝胆酸经内标归一化的基质因子总精密度均不超过8.1%;两个浓度水平下,溶血基质的精密度小于3.0%,高脂基质的精密度小于3.2%。甘氨酸奥贝胆酸和牛磺酸奥贝胆酸储备液在室温放置17.2小时,-20°C条件下保存45天稳定性良好;甘氨酸奥贝胆酸血浆样品在室温下放置16.4小时,-70°C条件下5次冻融循环,-20°C条件下4次冻融循环,-70°C条件下长期冻存142天,-20°C条件下长期冻存51天稳定性良好;牛磺酸奥贝胆酸血浆样品在室温下放置16.4小时,-70°C条件下5次冻融循环,-20°C条件下4次冻融循环,-70°C和-20°C条件下长期冻存142天稳定性良好;血浆样品处理后的上清液在8°C自动进样器中放置5天23小时稳定性良好。该方法符合生物样品分析要求。2.奥贝胆酸片生物等效性研究结果:使用已经验证的分析方法对48例健康受试者服用参比制剂/受试制剂进行血药浓度检测,用Phoenix Win Nonlin6.4计算药动学参数。由于奥贝胆酸存在显著的肝肠循环,因此无法评价其AUC0-∞,故而主要评价指标为Cmax、AUC0-t。空腹条件下,奥贝胆酸Cmax、AUC0-t的SWR均不低于0.294,采用RSABE法评价,界值标准分别为-0.110、-0.078,均小于0,GMR点估计值分别为1.009、1.015,均在0.80～1.25之间;甘氨酸奥贝胆酸Cmax、AUC0-t的SWR均小于0.294,采用ABE法评价,90%置信区间分别为94.89%～110.66%、94.66%～104.76%,均落在80.00%～125%范围内;牛磺酸奥贝胆酸Cmax的SWR大于0.294,采用RSABE法评价,点估计值为1.016,在0.80～1.25之间,界值标准为-0.083,小于0,AUC0-t的SWR小于0.294,采用ABE法评价,90%置信区间为91.48%～107.87%,在80.00%～125%范围内。餐后条件下,奥贝胆酸Cmax的SWR大于0.294,采用RSABE法评价,点估计值为1.009,在0.80～1.25之间,界值标准为-0.110,小于0,AUC0-t的SWR小于0.294,采用ABE法评价,90%置信区间为94.85%～105.13%,在80.00%～125%范围内;甘氨酸奥贝胆酸Cmax、AUC0-t的SWR均小于0.294,采用ABE法评价,90%置信区间分别为96.23%～108.52%、97.98%～107.86%,均落在80.00%～125%范围内;牛磺酸奥贝胆酸Cmax的SWR大于0.294,采用RSABE法评价,点估计值为1.150,在0.80～1.25之间,界值标准为-0.003,小于0,AUC0-t的SWR小于0.294,采用ABE法评价,90%置信区间为101.97%～117.74%,在80.00%～125%范围内。根据以上数据表明,在空腹和餐后条件下,受试制剂和参比制剂两制剂均具有生物等效。结论:本研究首次报道了同时测定人血浆中甘氨酸奥贝胆酸和牛磺酸奥贝胆酸浓度的LC-MS/MS方法,该方法简便、灵敏、专属性较好,符合《生物样品定量分析方法验证指导原则》要求,可用于临床试验血浆样品的分析。奥贝胆酸片受试制剂和参比制剂在空腹和餐后两种条件下均具有生物等效性。