【摘 要】
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以Streptoverticilliummobaraense发酵生产谷氨酰胺转胺酶在下罐后,经板框压滤除去菌体,选用截留分子量10,000的超滤膜进行超滤,将滤液浓缩2.5~3倍.按浓缩液质量的1﹪加入大豆
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以Streptoverticilliummobaraense发酵生产谷氨酰胺转胺酶在下罐后,经板框压滤除去菌体,选用截留分子量10,000的超滤膜进行超滤,将滤液浓缩2.5~3倍.按浓缩液质量的1﹪加入大豆蛋白后按体积比1:1.5添加乙醇将酶蛋白沉淀,离心后将沉淀的酶泥进行冷冻干燥或真空干燥.最后将粗酶充分粉碎,按需要添加大豆蛋白制成成品酶制剂.从发酵液下罐到制得粗酶,平均的酶活收率约在65-70﹪之间,成功的批闪酶活收率可达到72﹪以上.粗酶通过Superdex75凝胶过滤层析和Source30S离子交换层析进行两步纯化,纯化样品经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现单一条带,因而初步认为获得了纯酶.纯化过程中,总的酶活收率为52.0﹪,共纯化了6.76倍.通过凝胶过滤法测得该酶相对分子质量约为39,500Da.通过酶学性质研究测得粗酶的最适温度在52℃左右,温度稳定范围在40℃以下,最适pH在6.0左右,pH稳定范围在4.0-8.0.综合考虑各种因素,该酶理想的使用温度应当在35℃-45℃左右,使用pH应当在5.0-8.0范围内.
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