表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGF）信号系统具有调控细胞增殖、迁移和分化的功能,参与包括器官发育、机体生长、生殖及创口修复等一系列重要的生理过程。在脊椎动物中,EGF与表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）特异性结合后,使EGFR二聚化并激活胞内域自磷酸化,能以自分泌/旁分泌的方式参与生殖调控。在无脊椎动物中,EGFR的相关研究除了模式生物果蝇以外,在其他物种的报道较为少见。拟穴青蟹（Scylla paramamosain）是我国东南沿海地区重要的经济蟹类。本研究以拟穴青蟹雌蟹为实验对象,通过转录组序列筛选、分子克隆、生物信息学分析等技术成功鉴定了SpEGFR,并结合RT-PCR、qRT-PCR及原位杂交等技术检测SpEGFR的时空表达和分布情况,最后通过离体实验,分别添加配体蛋白和EGFR抑制剂以探究EGFR在卵巢发育过程中的作用。主要研究结果如下:从拟穴青蟹中克隆了SpEGFR的cDNA全长序列,序列分析发现切除信号肽段后的成熟SpEGFR蛋白为跨膜蛋白,且主要由含两个配体结合区和七个FU结构域的胞外区,一个疏水跨膜区,以及含一个酪氨酸激酶结构域（TyrKc）的胞内区三部分组成。氨基酸序列比对和进化树分析发现,SpEGFR的结构保守且与其他物种的EGFR有较高的同源性。半定量RT-PCR检测发现SpEGFR在拟穴青蟹各检测组织中广泛分布且在卵巢组织高表达;实时荧光定量qRT-PCR发现与卵黄发生前期相比,SpEGFR的表达量在卵黄发生早期显著上升至较高水平,并且保持至卵黄发生晚期;原位杂交发现SpEGFR阳性信号主要定位在卵黄发生早期卵巢的卵母细胞,且在核周区域尤为明显,这些结果均提示SpEGFR可能参与拟穴青蟹的卵巢发育。利用人源表皮生长因子（human epidermal growth factor,hEGF）进行离体实验来探究拟穴青蟹EGFR在卵巢发育过程中的功能。结果表明,对于卵黄发生晚期的夏季青蟹,添加1 nM hEGF培养1 h就能显著性诱导卵巢组织Sp VgR、SpCyclinB的表达,而SpEGFR的表达量没有显著变化;对于相同卵黄发生阶段的冬季青蟹,当添加浓度增加为10 nM且培养时间延长至12 h,才能促进Sp VgR、SpCyclinB的显著性表达。这表明hEGF蛋白能够有效激活拟穴青蟹EGFR,并可能通过MAPK信号通路激活下游SpVgR、SpCyclin B表达进而促进卵巢发育;而SpEGFR作为受体酪氨酸激酶家族成员,应该是通过分子构象及磷酸化水平的改变来发挥作用。有趣的是,卵黄发生阶段相同但季节不同的青蟹对hEGF的生理响应有很大的差别,这可能归因于冬季青蟹代谢和生理敏感性下降。另外,用EGFR抑制剂AG1478和PD153035预处理卵黄发生晚期的冬季青蟹卵巢组织,发现AG1478和PD153035都能抑制hEGF诱导（添加浓度10 nM,培养12 h）的下游基因SpVgR、SpCyclin B表达,进一步证实了 EGF-EGFR信号系统参与调控拟穴青蟹的卵巢发育。综上所述,在hEGF诱导下,拟穴青蟹EGFR参与促进卵巢发育,这一结果丰富了拟穴青蟹生殖内分泌调控网络。