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重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（简称TNHH）在白细胞抑制因子（NIF）和水蛭肽（Hirulog）中间加入了一段交联肽，能与血凝块中纤维蛋白结合的导向性，实现了降低NIF和Hirulog片段的风险性，增加有效性的目的，能有效抑制白细胞活化、迁移、粘附功能，抑制凝血酶活性、血细胞与纤维蛋白结合。本品在急性缺血性脑卒中动物模型中具有多重功效，能有效促进脑组织损伤修复和保护，改善局部抗凝微循环和血流再灌注，抑制凝血酶引起的脑水肿，促进脑血肿的吸收。目的：探讨重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白临床新靶点。方法：取健康人的纤维蛋白原（FIB）、抗凝血酶II（IAT-III）和纤维蛋白溶酶原（PLG）分别与TNHH进行体外结合实验，具体采用免疫印迹鉴别实验及分别结合HPLC分析，抗凝血酶III（AT-III）活性分析，D-二聚体转化实验中的D-二聚体含量测定分析判定。在上述实验判定靶点基础上，利用CADD（计算机辅助药物设计）与可能的新靶点纤维蛋白原（FIB），抗凝血酶II（IAT-III）和纤维蛋白溶酶原（PLG）进行分子对接（DOCK），采用PSIPRED2.4，Sybyl8.0和Discovery Studio2.5软件进行靶点验证结果。结果：重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（TNHH)分别与纤维蛋白原（FIB），抗凝血酶III（AT-III）和纤维蛋白溶酶原（PLG）进行免疫印迹鉴别实验，兔抗TNHH多抗与TNHH+FIB和TNHH+AT-III实验组的免疫印迹结果呈阴性，而与TNHH+PLG实验组的免疫印迹结果呈阳性。鼠抗纤维蛋白原（FIB）单抗，鼠抗凝血酶III（AT-III）单抗分别与TNHH+FIB和TNHH+AT-III实验组的免疫印迹结果呈阴性，而鼠抗维蛋白溶酶原（PLG）单抗和TNHH+PLG的免疫印迹结果呈阳性。这说明TNHH中不含有纤维蛋白原（FIB）或抗凝血酶III（AT-III），而TNHH中含有维蛋白溶酶原（PLG），表示TNHH与FIB或AT-III无结合，而与PLG有结合。将纤维蛋白原（FIB）与TNHH进行体外结合实验的HPLC分析，结果显示：标准对照TNHH的保留时间为16.335min，峰面积为33578168.000；阳性对照TNHH+兔抗TNHH多抗中TNHH的保留时间为16.095min，峰面积为13985716.804；实验组TNHH的保留时间为15.655min，峰面积为34964292.010；这表明标准对照中的TNHH和实验组中的TNHH峰面积并没有太大差异，表明FIB与TNHH无结合。将抗凝血酶III（AT-III）与TNHH进行体外结合实验的AT-III：A活性分析，结果显示：标准对照AT-III的活性为104.7%，阳性对照AT-III的活性为48%，实验组AT-III的活性为109.3%，这表明标准对照AT-III和实验组AT-III的活性二者之间并没有显著的差异，说明抗AT-III与TNHH无结合，不能抑制抗凝血酶III的活性。将纤维蛋白溶酶原（PLG）与TNHH进行体外结合实验的D-二聚体转化实验分析，结果显示：阳性对照有D-二聚体生成，并且含量为0.246mg/L。实验组有D-二聚体生成，并且含量为0.068mg/L。这说明纤维蛋白溶酶原（PLG）与TNHH有结合，产生纤维蛋白溶酶，纤维蛋白溶酶催化纤维蛋白降解生成D-二聚体。通过计算机辅助药物设计（CADD）的PSIPRED，Sybyl8.0和Discovery Studio2.5软件分析，纤维蛋白溶酶原（PLG）C端的第153位Arg至175位的Tyr为一段保守序列RNPDNDPQGPWCYTTDPEKRYDY与重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白（TNHH）的C端的第133位Lys至140位的Tyr为一段保守序列KEGEGVLY在蛋白质的空间结构中存在相互作用，而纤维蛋白原（FIB）和抗凝血酶III(AT-III)均没有功能核心区域与TNHH之间有相互作用。结论：通过免疫印迹鉴别实验，HPLC实验，AT-III：A活性实验和D-二聚体转化实验分析，以及结合PSIPRED，Sybyl8.0和Discovery Studio软件进行靶点验证分析。可以初步得出结论是：TNHH临床新靶点为纤维蛋白溶酶原（PLG）。