【摘 要】
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目的:构建hGRα重组原核表达质粒并进行诱导表达,为下一步研制hGRα ELISA检测试剂盒和进一步研究GR与中医学阴阳虚证的关系服务。 方法:以含有hGRα cDNA的重组克隆质粒p
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目的:构建hGRα重组原核表达质粒并进行诱导表达,为下一步研制hGRα ELISA检测试剂盒和进一步研究GR与中医学阴阳虚证的关系服务。 方法:以含有hGRα cDNA的重组克隆质粒pRShGRα为模板,通过PCR扩增得到hGRα的两种基因片段,将这两种基因片段分别克隆到pGEM-T载体上,进而亚克隆到pGEX-4T-3表达载体上。将这两种重组表达质粒进行酶切、测序鉴定后,分别转化大肠杆菌DH5α和BL21(DE3),并在一定的条件下进行重组蛋白的诱导表达,诱导表达产物行SDS-PAGE和Western blotting分析。 结果:酶切和测序结果证明hGRα的两种基因片段均成功地重组入pGEX-4T-3载体。诱导表达产物的SDS-PAGE和Western blotting分析均提示有hGRα目的蛋白特异表达。 结论:本实验成功构建了hGRα的两种重组原核表达质粒,并成功诱导了它们的原核表达,为下一阶段的研究奠定了基础。
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