基质金属蛋白酶7(Matrix metalloproteinases 7,MMP7)和基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinases 9,MMP9)属于基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)基因家族中的成员。肠毒素大肠杆菌F18(Enterotoxigenic Escherichia coli F18,ETEC F18)是引起仔猪腹泻的主要病原菌,研究表明ETEC F18感染仔猪后,MMP7和MMP9基因在抗性个体十二指肠中的表达量高于敏感个体。鉴于此,本研究选择猪MMP7和MMP9基因作为仔猪腹泻的候选基因,利用q RT-PCR检测了MMP7和MMP9基因在断奶仔猪胃肠道等组织的表达模式;构建p EGFP-C1-MMP7和p EGFP-N1-MMP9真核表达质粒,进行融合蛋白亚细胞定位研究;在民猪和长白群体中进行MMP7和MMP9基因多态位点与哺乳仔猪腹泻评分和生长性状的关联分析;利用5’缺失试验分析鉴定MMP9基因启动子区域;主要研究结果如下:(1)采集28日龄断奶仔猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃肠道等组织,提取RNA,反转录c DNA,利用q RT-PCR检测MMP7和MMP9基因的组织表达模式,结果发现MMP7和MMP9基因在胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠等组织均表达。(2)构建p EGFP-C1-MMP7和p EGFP-N1-MMP9重组质粒,分别转染猪肾细胞(Porcrne kidney-15,PK15)和猪小肠上皮细胞(Porcine intestinal epithelial cells line,IPEC-J2),通过倒置荧光显微镜检测发现MMP7和MMP9融合蛋白定位于细胞质中。(3)利用直接测序法研究猪MMP7基因的遗传变异,使用Hae III PCR-RFLP方法对SNP rs327380117进行基因分型,在民猪和长白仔猪群体中进行单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)与腹泻评分和生长性状的关联分析。结果表明:在长白群体中TT基因型的腹泻评分显著低于TC基因型(P<0.01),TT基因型个体的14日龄体重显著低于TC基因型个体(P<0.05)。对本课题组前期发现的猪MMP9基因的三个SNPs与民猪和长白仔猪的腹泻评分和生长性状进行关联分析。结果表明,在民猪群体中,AA基因型(g.48178429G>A)的腹泻评分低于GA基因型(P<0.05);在长白猪群体中,AA基因型的35日龄体重和日增重都分别低于GG基因型(P<0.05)。对于rs336583561,民猪仔猪的GG基因型与AG基因型相比有着较低的腹泻评分(P<0.05)。对于g.48184777C>T,长白仔猪CC个体的出生重以及第3、7、14、21、28、35日龄体重均高于TC个体(P<0.05或P<0.01)。(4)生物信息学分析发现MMP7基因编码区的SNPs为同义突变。MMP9基因SNP g.48178429G>A位于MMP9-203转录本5’侧翼区域,5’缺失实验发现该区域没有启动子活性。综上,本研究发现猪MMP7和MMP9基因在断奶仔猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和胃肠道等检测的组织中均表达。EGFP-MMP7和EGFP-MMP9融合蛋白定位于PK15和IPEC-J2细胞的细胞质。MMP7基因SNP rs327380117与长白仔猪腹泻相关;猪MMP9基因SNP g.48178429G>A和rs33658361与民猪仔猪腹泻相关;g.48178429G>A和g.48184777C>T与长白仔猪生长性状相关。MMP9基因启动子活性区域位于MMP9-201转录本5’侧翼区域。