【摘 要】
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目的:间充质干细胞衍生的外泌体（MSC-Exo）已被认为是急性肺损伤（ALI）的一种有前景的治疗策略。近来,内皮细胞焦亡被证明在脓毒症肺损伤的进展中起着重要的作用。然而,MSC-Exo是否通过调节内皮细胞焦亡来改善肺损伤仍然未被阐明。因此本研究旨在通过体外实验探究MSC-Exos对肺微血管内皮细胞（HPMEC）焦亡的调控作用及其分子生物学机制。方法:1.从人脐带间充质干细胞（hUCMSC）中分离外
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.82172174）hUCMSC外泌体来源的circNAGPA通过竞争性结合miR-34a-5p调控LPS诱导肺微血管内皮细胞损伤的分子机制研究
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目的:间充质干细胞衍生的外泌体（MSC-Exo）已被认为是急性肺损伤（ALI）的一种有前景的治疗策略。近来,内皮细胞焦亡被证明在脓毒症肺损伤的进展中起着重要的作用。然而,MSC-Exo是否通过调节内皮细胞焦亡来改善肺损伤仍然未被阐明。因此本研究旨在通过体外实验探究MSC-Exos对肺微血管内皮细胞（HPMEC）焦亡的调控作用及其分子生物学机制。方法:1.从人脐带间充质干细胞（hUCMSC）中分离外泌体（hUCMSC-Exo）,并通过透射电子显微镜（TEM）、纳米粒子跟踪分析（NTA）及蛋白质免疫印迹进行鉴定。2.对肺微血管内皮细胞进行LPS+ATP诱导构造体外内皮细胞焦亡模型,CCK-8测定细胞活力,ELISA、LDH释放测定及蛋白质免疫印迹检测HPMEC焦亡。3.PKH26标记hUCMSC-Exo并用荧光显微镜观察HPMEC摄取外泌体情况。ELISA、LDH释放测定、q RT-PCR及蛋白质免疫印迹检测hUCMSC-Exo对HPMEC细胞焦亡的影响。4.q RT-PCR及蛋白质免疫印迹检测hUCMSC-Exo中ACE2含量,蛋白质免疫印迹检测hUCMSC-Exo对HPMEC中ACE2表达量的影响。5.慢病毒转染的方法构造过表达ACE2的HPMEC模型,按（1）空白对照组（加等量PBS）（2）lv-NC组（加等量PBS）（3）LPS+ATP+lv-NC组（4）LPS+ATP+lv-ACE2组分组按上述方法验证过表达ACE2对细胞焦亡的影响。蛋白质免疫印迹检测上述各组中NLRP3及Nrf2表达变化。结果:成功提取并鉴定了hUCMSC-Exo。1μg/ml LPS24h+5m M ATP4h诱导HPMEC细胞发生焦亡,Caspase-1激活、GSDMD蛋白N端切割、成熟IL-1β、IL-18表达量及LDH释放增多证明了焦亡造模的成功。hUCMSC-Exo能被HPMEC摄取并改善细胞焦亡,降低焦亡相关蛋白及m RNA水平、炎症因子的分泌及LDH释放。hUCMSC-Exo中富集ACE2蛋白及其m RNA,且hUCMSC-Exo能显著上调HPMEC中ACE2的表达。发生焦亡的HPMEC中ACE2含量明显降低。在慢病毒转染方法构建的ACE2过表达HPMEC模型中发现,ACE2过表达对内皮细胞焦亡有明显的抑制作用,而且过表达ACE2能部分恢复Nrf2的表达,抑制NLRP3的激活。结论:我们的研究结果表明,hUCMSC-Exo能够上调HPMEC中ACE2表达,抑制LPS+ATP诱导的肺微血管内皮细胞焦亡,其机制可能是通过Nrf2信号蛋白抑制NLRP3炎症小体的激活发挥作用。
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