携抗p53抗体纳米金微囊声学造影剂早期诊断乳腺癌的超声分子显像研究

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目的:制备携抗p53抗体包载全氟丙烷(C3F8)的纳米金壳聚乳酸羟基乙酸(PLGA)核声学造影剂,对其物理性质进行表征,并定性定量观察其体内外超声靶向显像性能。方法:采用改进的单乳化挥发法、种子生长法及碳二亚胺法制备携抗p53抗体的纳米靶向超声造影剂(gold nanoshelled poly(D,L-lactide-co-glycolic acid)nanocapsules carrying anti p53 antibody,p53-PLGA@Au NCs),用高分辨扫描及透射电镜、马尔文纳米粒度电位分析仪等观察其形态粒径等;用细胞毒性实验考察其体内外细胞毒性;利用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等评估其体外寻靶能力及超声显像效果;建立裸鼠乳腺癌动物模型,采用22和50 MHz两种超声频率探讨纳米微囊体内超声分子显像效果,并检测裸鼠体内金元素观察微囊体内分布。结果:p53-PLGA@Au NCs呈球形或类球形,分散性好,平均粒径为247.7±108.2 nm,分散指数为0.127,Zeta电位是-34.2±5.8 mV;体外寻靶实验显示高表达p53蛋白的人乳腺癌MCF-7细胞周围有大量靶向纳米微囊环绕,流式细胞仪结果显示p53-PLGA@AuNCs与乳腺癌MCF-7细胞的结合率为73.00±5.21%,显著高于其与低表达p53蛋白的乳腺癌MDA-MB-231细胞(2.21±0.45%)的结合率,差异有统计学意义(P<0.001);体外超声实验中p53-PLGA@Au NCs在2mg/mL浓度时超声强度峰值达86.8 dB,成像时间可持续8 min以上;体内超声显像实验中,在22 MHz及50 MHz两种不同频率下,p53-PLGA@Au NCs绿色彩色编码增强信号均十分明显,时间-强度曲线量化数据也显示靶向微囊的成像效果优于非靶向材料组和靶向封闭组。结论:成功制备携抗p53抗体的PLGA@Au靶向纳米微囊声学造影剂,粒径小,稳定性高,无明显细胞毒性,体内外靶向超声显像效果良好,有望为乳腺癌的早期诊断提供新思路。
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