【摘 要】
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目的:识别子痫前期相关基因,探索焦点基因潜在功能。方法:通过分析公开数据建立假设:利用人类蛋白图谱提供的免疫组化数据和单细胞测序数据筛选正常胎盘组织和滋养细胞m RNA及蛋白水平均存在表达基因。随后从基因表达数据库获取2000-2020年公开发表的包括子痫前期患者的观察性转录物组数据集,提取GSE10588,GSE24129,GSE30186,GSE35574的B批次,GSE54618及GSE75
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目的:识别子痫前期相关基因,探索焦点基因潜在功能。方法:通过分析公开数据建立假设:利用人类蛋白图谱提供的免疫组化数据和单细胞测序数据筛选正常胎盘组织和滋养细胞m RNA及蛋白水平均存在表达基因。随后从基因表达数据库获取2000-2020年公开发表的包括子痫前期患者的观察性转录物组数据集,提取GSE10588,GSE24129,GSE30186,GSE35574的B批次,GSE54618及GSE75010的数据,共包括104个子痫前期和112个正常妊娠产后胎盘。利用Limma包内置算法进行差异表达分析,依据是否能识别公认基因FLT-1决定是否纳入后续研究。对符合条件的5个数据集采用Robust Rank Aggreg（RRA）算法,整合差异表达结果,识别焦点基因。对焦点基因进行单基因分析,探索焦点基因表达水平与孕妇临床特征的潜在关系。为预测SLC20A1可能的功能,对GSE75010与GSE54618构建WGCNA网络寻找与SLC20A1共表达并且与孕妇临床特征相关的基因模块,对识别模块包含的共同基因进行功能富集分析。通过离体实验验证公开数据分析结果:采用逆转录实时定量聚合酶链式反应实验和蛋白印记实验验证候选基因在子痫前期与正常血压孕妇胎盘组织中的表达情况。构建候选基因敲除HTR-8/SVneo细胞模型,随后进行划痕实验和Transwell实验,探究候选基因的生物学功能。最后通过蛋白印记实验检测候选基因对E-Cadherin和Vimentin表达的影响。结果:1.多基因整合分析识别SLC20A1,作为后续研究关注的焦点。单基因分析提示胎盘组织中SLC20A1表达水平与早发型子痫前期发病相关。WGCNA识别共表达基因的分子功能主要富集在微管蛋白结合,小GTP酶结合,Rho GTP酶结合,Ras GTP酶结合和GABA受体结合。2.体外验证子痫前期较正常血压孕妇胎盘组织SLC20A1/Pi T-1表达水平下调。3.干扰SLC20A1后HTR-8/SVneo细胞的迁移、侵袭能力受抑制。4.干扰SLC20A1后HTR-8/SVneo细胞的E-cadeherin上调,Vimentin下调。结论:胎盘组织SLC20A1表达改变可能与子痫前期相关。体外干扰SLC20A1细胞迁移侵袭能力受损,这可能与上皮-间质转化相关。
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