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目的:骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell,BMSC）与胰岛细胞共移植后能提高移植物的存活率,促进移植物的增殖并增加胰岛素释放量,因此将BMSC与胰岛进行共移植也许是解决单独胰岛移植问题的可行方案,但此方案需要大量的BMSC,故寻找能刺激BMSC增殖,并能调控其分泌功能的药物具有一定的现实意义。我们以大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）及大鼠BMSC为研究对象,应用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）建立胰岛细胞炎症损伤模型,探究扶芳藤含药血清促进大鼠BMSC增殖的机制,观察BMSC与INS-1细胞共培养时,扶芳藤含药血清预处理BMSC对INS-1细胞炎症损伤的保护作用。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离、培养大鼠BMSC,显微镜下对其进行细胞形态学观察,采用流式细胞仪对BMSC的表面标志物CD44、CD45、CD90进行鉴定;SD大鼠扶芳藤提取液灌胃,2次/d,1周后腹主动脉取含药血清。采用不同浓度（1%、2%、4%、8%、16%）的含药血清对大鼠BMSC进行干预,以MTT法检测其吸光度,对比各组细胞生长情况;使用siRNA法沉默Notch1信号通路;随后将大鼠BMSC分为空白对照组、扶芳藤含药血清组、Notch1 siRNA组和Notch1 siRNA+扶芳藤含药血清组,使用MTT法检测扶芳藤含药血清干预BMSC后的增殖率;继续培养24 h后,取各组总RNA及总蛋白检测Notch1信号通路相关基因Jagged1、NICD、DLL1 mRNA及Jagged1、Notch1、DLL1、Hes1、Hey1蛋白的含量。MTT法检测LPS在不同时间和浓度下干预INS-1细胞的活力;用LPS建立INS-1细胞炎症损伤模型与扶芳藤含药血清预处理的BMSC共培养,用ELISA试剂盒检测细胞上清液中TNF-α、IL-6和胰岛素的含量。结果:1.用倒置显微镜对分离的SD大鼠BMSC进行观察,96 h时,细胞集落面积不断增大,且与周边集落逐渐融合生长。传至第1代时,细胞钝化,形态较为单一,呈长梭形贴壁生长,以平行排列生长为主或呈漩涡状生长。2.流式细胞仪检测BMSC的表面抗原特性,结果显示,培养的第3代大鼠BMSC阳性表达CD90、CD44,阳性率分别为98.22%、86.95%,而CD45呈阴性,阴性率为9.9%。3.采用不同浓度的扶芳藤含药血清对大鼠BMSC进行干预,以MTT法检测其吸光度值,结果显示扶芳藤含药血清浓度在1%-16%之间对BMSC增殖有促进作用,随着浓度的升高,增殖作用越明显,当含药血清浓度为8%时,对细胞的增殖作用最为显著（P＜0.01）,随着浓度继续升高,增殖率呈现出下降趋势,故浓度为8%的扶芳藤含药血清为最佳药物干预浓度。4.siRNA沉默Notch1 24 h后,提取总RNA,对Notch1 mRNA表达情况进行检测。结果显示,与NC siRNA组相比,Notch1 siRNA组Notch1mRNA表达下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。5.使用MTT法检测扶芳藤含药血清对BMSC的增殖率,结果发现与空白对照组比较,含药血清组和Notch1 siRNA+含药血清组BMSC的增殖率均升高,Notch1 siRNA组BMSC的增殖率下降（均为P＜0.05）;与Notch1 siRNA组比较,Notch1 siRNA+含药血清组BMSC的增殖率升高（P＜0.05）。6.含药血清干预24 h后,采用RT-q PCR法检测Notch1信号通路相关基因Jagged1、NICD、DLL1的mRNA相对表达量。结果显示,与空白对照组相比,扶芳藤含药血清组Jagged1、NICD、DLL1的mRNA含量升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,Notch1 siRNA组Jagged1、NICD、DLL1的mRNA含量下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,与Notch1 siRNA组相比,Notch1 siRNA+扶芳藤含药血清组Jagged1、NICD、DLL1的mRNA含量升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。7.含药血清干预24 h后,采用Western Blot法检测Notch1信号通路相关蛋白Jagged1、Notch1、DLL1、Hes1、Hey1的相对表达量。结果显示,与空白对照组相比,扶芳藤含药血清组Jagged1、Notch1、DLL1、Hes1、Hey1的蛋白含量升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;Notch1 siRNA组Jagged1、Notch1、DLL1、Hes1、Hey1的蛋白含量下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。与Notch1 siRNA组相比,Notch1 siRNA+扶芳藤含药血清Jagged1、Notch1、DLL1、Hes1、Hey1的蛋白含量升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。8.使用不同浓度的LPS诱导INS-1细胞炎症损伤,结果发现,随着LPS浓度的不断升高,INS-1细胞的活力不断下降,LPS在作用6 h时,对于INS-1细胞的半数致死量（IC50）为1.93μg/m L;LPS在作用12 h时,对于INS-1细胞的IC50为1.76μg/m L;LPS在作用24 h时,对于INS-1细胞的IC50为1.21μg/m L。后续实验选取的作用时间为24 h,干预浓度为1.21μg/m L。9.ELISA检测各组TNF-α、IL-6的含量,结果发现与空白组相比,模型组INS-1细胞培养上清中TNF-α、IL-6含量明显升高,差异有统计学意义（P＜0.01）;与模型组相比,对照组和实验组INS-1细胞培养上清中TNF-α、IL-6含量明显下降,差异有统计学意义（P＜0.01）,与对照组相比,实验组INS-1细胞培养上清中TNF-α、IL-6含量明显下降,差异有统计学意义（P＜0.01）。10.ELISA检测各组Insulin的含量,结果发现与空白组相比,模型组INS-1细胞培养上清中Insulin含量明显下降,差异有统计学意义（P＜0.01）;与模型组相比,对照组和实验组INS-1细胞培养上清中Insulin含量明显上升,差异有统计学意义（P＜0.01）,与对照组相比,实验组INS-1细胞培养上清中Insulin含量明显上升,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论:1.扶芳藤含药血清能促进大鼠BMSC的增殖;2.扶芳藤含药血清促进大鼠BMSC增殖的作用机制与Notch1信号通路激活有关;3.扶芳藤含药血清干预后的BMSC能促进胰岛细胞胰岛素的释放量,改善炎症损伤应激引起的胰岛素释放功能受损。