论文部分内容阅读
鲍鱼是一种珍贵的海产经济动物,具有很高的营养和药用价值。在鲍鱼加工过程中,大量的鲍鱼内脏被丢弃,造成严重的经济损失和环境污染。鲍鱼性腺是内脏的主要部分,为提高鲍鱼内脏的利用价值,本文从鲍鱼性腺中提取、纯化了蛋白聚糖,并研究了其结构与生物活性,为鲍鱼内脏的综合开发利用奠定一定的理论和技术基础。本研究采用酶法结合醇提法提取鲍鱼性腺蛋白聚糖,最佳提取方法如下：新鲜鲍鱼性腺冻干后粉碎,干粉经木瓜蛋白酶水解24h(加酶量为底物质量的0.2%、料液比1:25、反应温度45℃、反应的pH7.0)后,水煮1h,酶解液于4000r/min离心10min,取上清液按体积比1:3加入50%乙醇搅拌提取1h,静止1h,再按体积比4:3加入沸甲醇混匀后静止24h,提取液经4000r/min离心10min后取上清液,经旋转蒸发蒸去甲醇、乙醇即得到蛋白聚糖粗品(CPG),得率为1.61%.。粗蛋白聚糖CPG经凝胶过滤层析结合阴离子交换层析纯化,具体步骤如下：CPG先用S-100凝胶过滤层析除杂,再用半制备高效液相色谱匹配Source30Q柱分离,最后用S-200凝胶过滤层析进行纯化。所得到的均一组分PGAG-2,其分子量约为10-13kDa,化学组成为多糖50.69%、蛋白2.01%、硫酸根31.13%、氨基己糖7.13%、氨基半乳糖1.33%、糖醛酸6.20%。其多糖部分由鼠李糖、岩藻糖、半乳糖以摩尔比为1.0:1.6:2.3组成。蛋白部分氨基酸组成为13种氨基酸,其中谷氨酸、甘氨酸和亮氨酸含量较高。均一性蛋白聚糖PGAG-2经化学法结合核磁法表征结构信息：构成PGAG-2全部单糖都以吡喃环形式存在,其中岩藻糖键型为1→2,1→4；半乳糖键型为1→2,1→2、6,1→4,1→4、6;鼠李糖键型为1→3,1→2、3,1→2、4,1→3、4,1→2、3、4。粗蛋白聚糖CPG和均一性蛋白聚糖PGAG-2的活性评价实验表明：CPG和PGAG-2都有较强的·OH及DPPH·青除能力、一定的还原能力及微弱的抗脂质过氧化能力。其中PGAG-2的抗氧化能力不及粗蛋白聚糖CPG,这可能是由于粗提物富含其它抗氧化组分,提高了样品的抗氧化能力；CPG和PGAG-2都有较强的血管紧张素转换酶(ACE)抑制能力,而CPG的抑制能力不及PGAG-2,这表明PGAG-2是一种很好的ACE抑制剂。