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目的:检测视网膜G蛋白偶联受体（Retinal G protein-coupled Receptors,RGR）在人正常皮肤组织、角质形成细胞增殖性皮损、人皮肤角质形成细胞、黑素细胞、成纤维细胞中的表达、分布及亚细胞定位,探索RGR对角质形成细胞功能的影响。方法:1、收集同一健康志愿者曝光及非曝光部位皮肤组织,利用免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）、多重免疫荧光、免疫印迹法（Western Bolt,WB）检测曝光及非曝光部位RGR的表达,胶体金免疫电镜染色（Immunoelectron microscopy,IEM）检测RGR的亚细胞定位。2、收集角质形成细胞增殖性病变:银屑病（Psoriasis）、脂溢性角化病（seborrheic keratosis,SK）和鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma,SCC）的皮损区及周边正常皮肤组织（paired adjacent normal skin tissues,PANST）,多重免疫荧光染色、免疫印迹检测RGR的蛋白表达水平。3、新鲜健康小儿包皮行真表皮分离后,利用胰酶消化法分离表皮角质形成细胞及黑素细胞,真皮贴壁法分离培养成纤维细胞。角质形成细胞、黑素细胞培养至第2代,利用分步胰酶消化法分别纯化角质形成细胞及黑素细胞并通过细胞形态、免疫荧光染色进行鉴定。真皮贴壁5-7天后,弃真皮组织,胰酶消化传代、纯化成纤维细胞,通过细胞形态、免疫荧光染色进行鉴定。4、利用免疫荧光、激光共聚焦、免疫印迹、核浆分离后免疫印迹检测RGR在人表皮角质形成细胞、黑素细胞及人皮肤成纤维细胞中的表达及核浆分布情况。5、存在或不存在全反式视黄醛（all-trans-retinal）情况下,利用紫外线A（Ultraviolet A,UVA）和（Ultraviolet radiation,UVR）照射角质形成细胞,24小时后收集细胞行免疫印迹检测RGR蛋白表达变化。6、利用si RNA抑制人原代表皮角质形成细胞RGR表达,免疫印迹检测抑制效率,抑制成功后,流式细胞术分析对照组及抑制组细胞周期、细胞凋亡的差异;划痕实验和Transwell实验评估对照组及沉默RGR对人角质形成细胞迁移能力的影响。7、利用慢病毒感染人角质形成细胞系Ha Cat细胞,构建过表达和敲低RGR的稳转细胞株,流式细胞分析过表达RGR组及敲低RGR组的细胞周期、细胞凋亡差异;划痕实验和Transwell评估过表达及敲低RGR组对人角质形成细胞迁移能力的影响。结果:1、正常皮肤中,免疫组化染色分析显示RGR主要位于表皮的基底层、棘层和真皮层的皮肤附属器（包括毛囊和汗腺）和小血管;组织多重免疫荧光染色结果显示RGR分布与免疫组化染色结果一致,此外RGR表达于基底层的角质形成细胞和黑素细胞中。免疫组化显示正常皮肤曝光部位的RGR表达相比于非曝光部位更高,结果有明显统计学意义（P＜0.05）。免疫电镜胶体金染色显示RGR主要富集于细胞核质和线粒体,少许分布于细胞浆。2、角质形成细胞增殖性疾病皮损中,组织多重免疫荧光染色分析显示皮损区组织RGR的表达比邻近正常皮肤组织（PANST）中染色强度更强;WB分析皮损区的RGR蛋白水平比PANST中高,WB灰度值定量统计分析有统计学差异（P＜0.05）。3、培养健康小儿包皮来源的原代角质形成细胞、原代黑素细胞和原代成纤维细胞至第三代后。显微镜下观察,角质形成细胞,呈铺路石样排列,免疫荧光显示PAN-CK和RGR双染阳性;黑素细胞呈树枝状突起生长,免疫荧光显示Melan A和RGR双染显示阳性;成纤维细胞呈长梭型生长,免疫荧光染色Vimentin和RGR双染阳性。4、激光共聚焦显微镜结果显示RGR在人原代角质形成细胞、原代黑素细胞和原代成纤维细胞的细胞膜和细胞核中均有阳性染色,角质形成细胞染色强度较强,且细胞核的荧光强度高于细胞膜;WB显示角质形成细胞的RGR水平显著高于黑素细胞和成纤维细胞,灰度值定量统计分析有统计学差异（P＜0.05）;核浆分离后进行WB显示核RGR表达高于细胞浆,并具有统计学意义（P＜0.05）。5、WB检测存在或不存在全反式视黄醛（all-trans-retinal）的情况下,暴露于UVA和UVR的正常角质形成细胞,RGR表达无统计学差异。6、si RNA转染人原代角质形成细胞后,WB显示:敲低组RGR表达明显低于对照组（P＜0.05）。慢病毒感染永生化的角质形成细胞（Ha Ca T）,荧光显微镜下观察到过表达及敲低组转染效率均大于90%;WB验证敲低组RGR的蛋白水平与对照组相比显著下降（P＜0.05）,过表达组RGR的蛋白水平相较对照组显著增加（P＜0.05）。7、流式细胞术分析敲低RGR后的角质形成细胞的周期和凋亡结果显示:RGR的敲除组角质形成细胞主要阻滞在S期,对照组、细胞凋亡增加。细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力,结果显示角质形成细胞中RGR的敲除导致迁移受到抑制。流式分析慢病毒感染Ha Ca T的周期和凋亡结果显示:RGR的敲除导致Ha Ca T的S期减少,G2/M期增加。增加了细胞凋亡,RGR的过表达导致Ha Ca T的S期增加,G2/M期减少。细胞凋亡未见明显统计学差异。Wound healing和Transwell实验检测细胞迁移能力,结果显示:RGR的敲除导致细胞迁移受到抑制;RGR的过表达导致细胞的迁移能力未受到明显改变。结论:1、这项研究首次证明了RGR在人类皮肤组织中的角质形成细胞、黑素细胞和成纤维细胞表达。2、RGR参与调控表皮角质形成细胞的增殖、迁移、周期和凋亡。