【摘 要】
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金刚烷胺类药物属于人类专用抗病毒药,对A型流感具有一定的预防与治疗作用。2005年我国农业部第560号公告以禁止抗病毒药物作为兽药使用,但因其对禽流感、新城疫及猪传染性胃肠炎有一定的治疗与预防作用,且廉价易得,因此,在食品性动物饲养过程中非法添加的现象较为广泛。金刚烷胺类药物毒副作用明显,耐药率高,且以原型形式代谢。如果金刚烷胺类药物在食品性动物养殖过程中滥用,药物将以原型的形式残留于食品性动物组
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金刚烷胺类药物属于人类专用抗病毒药,对A型流感具有一定的预防与治疗作用。2005年我国农业部第560号公告以禁止抗病毒药物作为兽药使用,但因其对禽流感、新城疫及猪传染性胃肠炎有一定的治疗与预防作用,且廉价易得,因此,在食品性动物饲养过程中非法添加的现象较为广泛。金刚烷胺类药物毒副作用明显,耐药率高,且以原型形式代谢。如果金刚烷胺类药物在食品性动物养殖过程中滥用,药物将以原型的形式残留于食品性动物组织中,通过食物链在人体内蓄积,将会给消费者的生命健康带来一定的安全隐患。然而,我国尚未建立关于金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚在食品性动物组织中残留检测技术标准,对于金刚烷胺类药物在食品性动物组织中残留的现象无法实施监控。因此,开展金刚烷胺类药物在食品性动物组织中残留方法的研究,以及探索金刚烷胺在白羽肉鸡体内不同组织的残留消除规律,能有效地监管金刚烷胺类药物在食品性动物养殖中的违规使用。试验通过对样品前处理方法进行了改进与创新,以及对色谱条件和质谱条件进行了全面的优化,建立了食品性动物组织中金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚的HPLC-MS/MS方法并利用本试验所建立的方法对金刚烷胺在白羽肉鸡体内的残留消除规律进行了研究。主要研究内容如下:(1)HPLC-MS/MS测定食品性动物组织中金刚烷胺类药物残留的方法研究样品经酸化乙腈与三氯乙酸重组溶液提取,加入金刚烷胺-d15、金刚乙胺-D4内标与无水硫酸钠,涡旋振荡、超声提取后,氮气吹干,流动相复溶后,经30 mg C18、40 mg PSA与50 mg中性氧化铝分散固相萃取剂净化,经Shim-pack GIST C18-AQ HP色谱柱分离,并以0.1%甲酸水和甲醇为流动相进行梯度洗脱,采用多反应(MRM)监测正离子模式测定。结果表明三种金刚烷胺类药物在1~100μg/kg浓度范围内线性关系良好,相关系数r≧0.9992,方法检测限金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚分别为0.2、0.3、0.3μg/kg,定量限分别为0.5、1.0、1.0μg/kg,在鸡肉、猪肉、牛肉、鸡肝等9种食品性动物组织中的2、10、50μg/kg三个浓度水平进行加标回收试验,平均回收率在90.6~100.5%之间,日内精密度在2.45~6.36%之间,日间精密度均低于8.91%。所建立的方法操作简单、快速、灵敏度高能满足目前食品性动物组织中金刚烷胺类药物残留的定性与定量分析。(2)金刚烷胺在白羽肉鸡组织中分析方法的建立试验建立了金刚烷胺在白羽肉鸡体内的检测方法:金刚烷胺在血浆、肌肉、肝脏、脾脏组织的方法检出限分别为2.0μg/L、0.2、0.3、0.3μg/kg,定量限分别为6.0μg/L、1.0、1.0和1.0μg/kg,白羽肉鸡各组织中金刚烷胺回收率在90.0%~103.0%之间,日内RSD与日间RSD分别低于6.12%与9.37%。该方法能适用于金刚烷胺在白羽肉鸡体内血浆、肌肉、肝脏、脾脏的定性与定量分析。(3)金刚烷胺在白羽肉鸡体内的消除规律研究以30 mg/kg单剂量灌服给药后金刚烷胺在白羽肉鸡血浆、腿肌、胸肌、肝脏、脾脏组织中主要的药代动力学参数Tmax分别为8.542、8.321、8.455、8.000、8.371 h;T1/2β分别为:5.35、7.32、9.98、12.5、10.5 h;Cmax分别为:2.787μg/mL、0.221、0.196、3.937、2.036μg/g。以30 mg/kg多剂量连续灌服5 d给药后金刚烷胺在白羽肉鸡血浆、腿肌、胸肌、肝脏、脾脏组织中主要的药代动力学参数Tmax分别为10.23、12.36、13.78、10.31、11.25 h;T1/2β分别为:6.766、8.734、8.924、8.370、8.635 h;Cmax分别为:2.862μg/mL、0.465、0.429、4.436、2.484μg/g。单剂量给药与多剂量给药后血浆、腿肌、胸肌、肝脏、脾脏组织中金刚烷胺药物浓度在8~9 h均能达到峰值,体内残留时间较长,单剂量组与多剂量组相同组织中的T1/2β、Cmax结果相比有差异,但差异不明显。本研究建立了一种测定食品性动物组织中金刚烷胺药物残留的HPLC-MS/MS方法以及研究了金刚烷胺在白羽肉鸡体内的残留消除规律,为监管金刚烷胺类药物在食品性动物养殖中的违法使用提供了一定的理论依据。
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