目的：蛋白质是人体中重要的大分子化合物，高灵敏的蛋白质检测在疾病的临床诊断和治疗具有重要意义。因为许多少数重要的蛋白质足以影响到细胞生物学功能并触发病理生理过程。然而，由于许多蛋白质分子在体内的浓度很低，因此，低丰度蛋白的检测过程中的信号放大是一个关键问题。本文结合滚环扩增（rolling circle amplificationRCA）技术建立一种低丰度蛋白质的高通量检测方法，并将其用于血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的检测。方法：结合了灵敏度高和特异性强的滚环扩增（rolling circleamplification, RCA）技术和抗原-抗体免疫反应，设计出了一种联级信号扩增方法，以实现低丰度蛋白质的超灵敏检测。利用VEGF免疫试剂盒，以链酶亲和素为桥梁，生物素修饰的单链寡核苷酸引物可以高亲和力地连接到生物素标记的免疫复合物上，建立低丰度蛋白质的检测平台，通过RCA扩增形成大量的重复序列可以作为优良的模板，单链DNA分子上串联重复序列的每个单元均可与一个生物标记的杂交探针互补杂交，从而有利于链亲和素-辣根过氧化物的有序组装，进而实现信号的放大。结果：经过不断优化实验条件，对VEGF检测的灵敏度达到10fM。与常规的酶标二抗体系ELISA法相比，本方法具有更高的灵敏度，适于低丰度蛋白质的检测。结论：本研究所建立的滚环扩增策略具有很强的信号放大能力、极少的非特异性吸附和较低的背景信号，可以为多种低丰度蛋白检测提供新的技术支撑，为新的蛋白疾病标志物的筛选以及临床诊断提供有力的工具。