绿茶中化学成分的高通量靶向定性及几种绿茶的比较分析

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茶(Camellia sinensis L.)是世界上仅次于水而受欢迎的一种非酒精饮品,其中绿茶是最受欢迎的一种茶饮品之一。近年来相关研究表明,绿茶具有丰富的营养成分和生物活性,其品质会受到原料品种的影响。云南是我国古老的茶叶产地之一,普洱生茶(Pu-erh raw tea,PRT)是当地的一种传统茶。它采用云南大叶种为原料,以晒青的方式进行加工,属于绿茶,但与传统绿茶(traditional green tea,TGT)的原料品种(中小叶种)和加工工艺有所不同。此外,不同的采收季节,对茶叶中的化学成分、品质也存在一定的影响。建立高效、快速表征绿茶中多类化学成分的分析方法对绿茶的深入研究有着重要意义。本研究以不同原料的TGT和PRT以及不同采收季节的春季绿茶(Sprinsg green tea,SGT)和秋季绿茶(autumn green tea,AGT)为研究对象,采用超高效液相色谱-高分辨质谱(ultra performance liquid chromatography-high resolution mass spectrometry,UPLC-HRMS)联用技术、高通量定性策略,并结合化学计量学方法对绿茶中多类化合物进行了表征和比较分析。以下是本研究的主要内容:1.基于UPLC-HRMS联用技术对不同绿茶进行分析。本研究对样品前处理中的茶粉用量、超声提取温度进行了比较和优化。最终以0.1g的茶粉用量、40℃的超声温度为最佳。为了获取更加丰富的二级质谱(MS/MS)信息,本研究针对质谱扫描模式进行了比较和优化。根据样品中小分子化合物的质荷比分布情况,将质荷比分为四段(100-300 m/z、300-500 m/z、500-1000 m/z、1000-1500 m/z)。结果表明,同时采用正、负离子模式分开扫描和质荷比分段扫描时,可有效增加二级质谱的数量。2.基于UPLC-HRMS联用技术,建立高通量靶向定性分析策略。首先通过现有标准品、文献、数据库进行定性分析,并在此基础上构建整合过滤策略(包含氮规则过滤、质量亏损过滤、诊断碎片离子过滤、中性丢失过滤)和总结归纳同类型化合物的质谱裂解规律、色谱保留特征。整合过滤策略能有效地排除干扰质谱信息,快速地筛选出目标候选物;在缺乏标准品的情况下,总结的色谱、质谱特征能为化合物的更准确地定性分析提供依据。最终,共定性出315个化合物,包括了140个儿茶素类、78个黄酮类、65个酚酸类、18个氨基酸类、3个生物碱类、11个其它类化合物。3.采用相对校正因子内标法实现绿茶中化学成分的定量分析,并结合化学计量学方法揭示TGT与PRT之间以及SGT与AGT之间的差异性。偏最小二乘-判别分析(partial least squares–discriminant analysis,PLS-DA)方法与变量重要性投影(variable importance in projection,VIP)方法相结合筛选出了23个区分TGT与PRT的关键化合物,以及3个区分SGT与AGT的关键化合物。以筛选出来的特征变量构建PLS-DA模型,此模型能很好地区分TGT与PRT以及SGT与AGT。
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