【摘 要】
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人工授精后,奶牛的受精失败或在妊娠期间胚胎丢失造成繁殖失败,繁殖失败影响奶牛的繁殖效率。为了探讨人工授精后奶牛血浆物质变化对妊娠的影响,进一步阐明人工授精后奶牛血浆物质变化对代谢调节的作用,以期为奶牛早期妊娠影响提供参考依据。本研究开展以下试验:试验一:选择63头2～3胎、年龄和体况相近（体况评分BCS2.75左右）的健康荷斯坦奶牛。奶牛发情期后分别在人工授精当天、第5天、第17天和第28天（分别
【基金项目】
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国家自然科学基金（31660371）; The National Natural Science Foundation of China（31660371）
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人工授精后,奶牛的受精失败或在妊娠期间胚胎丢失造成繁殖失败,繁殖失败影响奶牛的繁殖效率。为了探讨人工授精后奶牛血浆物质变化对妊娠的影响,进一步阐明人工授精后奶牛血浆物质变化对代谢调节的作用,以期为奶牛早期妊娠影响提供参考依据。本研究开展以下试验:试验一:选择63头2～3胎、年龄和体况相近（体况评分BCS2.75左右）的健康荷斯坦奶牛。奶牛发情期后分别在人工授精当天、第5天、第17天和第28天（分别记为1d、5 d、17 d和28 d）晨饲前进行尾静脉采血,肝素钠抗凝离心收集血浆,测定孕酮、雌二醇及葡萄糖。在32±3天应用B超进行妊娠诊断检查,根据检测结果（当妊娠诊断之前发生返情奶牛作为返情组（A组,n=20）,妊娠检测时奶牛妊娠的为妊娠组（B组,n=24）,妊娠检测时奶牛未妊娠奶牛即为未妊娠组（C组,n=19））。用SPSS 23.0进行ONEWAY-ANOVA单因素方差分析。结果显示:5dB组和C组血浆中孕酮和雌二醇极显著高于A组（P<0.01）;17 d A组和B组血浆中孕酮和雌二醇极显著高于C组（P<0.01）,17 d血浆中P4/E2A组和B组极显著高于C组（P<0.01）;人工授精后第28天C组血浆孕酮含量显著高于A组（P<0.05）,28 d血浆葡萄糖含量B组显著高于A组（P<0.05）。综上表明:Sd和17d高浓度血浆的孕酮和雌二醇,可能有利于维持胚胎细胞正常发育和母体和胚胎识别,提高奶牛胚胎存活率。28 d低浓度的葡萄糖不利于妊娠。说明血浆中葡萄糖、孕酮和雌二醇对奶牛人工授精后不同阶段早期妊娠具有预测作用。试验二:随机每个阶段各组选择12头奶牛。采用UHPLC-Q/TOF-MS非靶向代谢组学技术检测分别对奶牛A组、B组、C组的1 d和5 d血浆进行了分析。根据多元统计和SPSS 23.0软件进行单因素方差分析,结合主成分分析（PCA）与正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）,以VIP>1、P<0.05、FC>1.3或FC<0.77筛选显著性差异代谢物。结果显示:1d热图差异代谢物不能很好聚集,表明筛选的显著性差异代谢物虽然能分开各组,但不能区分各组的样品,故不能作为生物标识物;5 d筛选出16种显著性代谢物,4个在A组高表达;1个在B组高表达;3个在C组高表达;5个在B组和C组高表达;2个在A组和C组高表达;1个在A组和B组高表达。对5d显著性差异代谢物进行KEGG代谢通路分析发现:丁酸酯代谢,丙酮酸代谢,丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢通路中相关代谢物琥珀酸半醛和乳酸发生了显著改变;妊娠组和未妊娠组奶牛血浆中磷脂酰胆碱显著高于返情组,妊娠和未妊娠组显著增多。综上表明:人工授精后第5天牛血浆代谢物通过丁酸酯代谢,丙酮酸代谢,丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢途径来维持奶牛健康,为胚胎发育提供能量,维持胚胎正常发育;磷脂酰胆碱有望作为奶牛妊娠识别生物标志物。
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