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黄瓜枯萎病是黄瓜生产中发病较重的土传病害,主要以土壤为传播媒介,防治难度大。木霉对多种病原菌引起的土传病害具有较好的防治效果。植物mi RNA通过转录后抑制靶基因的表达,来调节植物生长发育和应答各种非生物胁迫。目前木霉诱导的黄瓜枯萎病抗性机制尤其是mi RNA在其中的作用尚不明确。本研究首先筛选了对枯萎病菌拮抗作用较强的木霉菌株,分析了木霉菌通过调控活性氧（ROS）和对根系细胞周期影响从而提高对黄瓜枯萎病的拮抗机制,最后对木霉诱导的miRNA进行了分析。结果如下:1.采用平板对峙法,利用T11、T22、T24、TM、T28、T154 6株木霉,筛选得到对黄瓜枯萎病具有较高拮抗活性的木霉TM,其抑菌率为78.05%,经测定,木霉TM易挥发性代谢产物对枯萎病菌抑制率达72.5%,难挥发性代谢产物对枯萎病菌抑制率为61.73%。2.分析了预接种木霉对枯萎病菌侵染的黄瓜根系中的ROS含量的影响,与对照相比,预接种木霉黄瓜根中的H2O2含量增加了39.49%;只接种枯萎病菌的黄瓜根中H2O2和O2-含量显著增高,分别比对照植物高3.55倍和8.10倍。而先预接种木霉然后再侵染枯萎病菌的处理,根中H2O2和O2-含量明显降低,比只用枯萎病菌处理降低53.92%和57.31%。3.为分析细胞周期调节在木霉提高枯萎病抗性中的作用机制,测定了6个细胞周期相关基因在黄瓜根系中的表达。接种枯萎病菌导致黄瓜根系细胞死亡,细胞周期相关的基因表达水平均明显降低,而先接种木霉的处理则诱导了与细胞周期相关基因的显著上调。与只接种枯萎病菌相比,CDKA、CDKB、CycA、CycB、CycD3;1和CycD3;2的表达水平分别增加2.39、3.58、7.65、5.81、1.98和3.43倍,表明木霉接种可以诱导与细胞周期相关的基因明显上调,从而提高了根系细胞生活力。4.构建黄瓜小RNA文库,并利用Solexa测序技术对小RNA文库进行测序分析。结果表明,对照处理、接种枯萎病菌处理、先接种木霉再接种枯萎病菌处理、接种木霉处理分别获得了63781366条、52040096条、54159164条和42093177条的纯净测序reads。总共筛选出92个已知miRNA,预测到63个新mi RNA。与对照相比,枯萎病侵染处理的黄瓜根系中有62个miRNA表达发生显著变化;将先接种木霉再接种枯萎病菌处理与只接种枯萎病菌处理进行比较分析发现,有60个miRNA发生了显著性变化。碱基分布统计分析结果显示,四个小RNA文库中在植物中含量较多的长度为21 nt和22 nt的新miRNA序列首位点碱基U所占比例较大;在序列碱基11位点,四个样品的新miRNA序列的碱基都偏向于A,符合miRNA序列特征,说明新mi RNA序列的预测结果可行性高。针对筛选出的9个差异表达的已知miRNA,利用qRT-PCR对其表达结果进行测序结果验证,相符率达到了94.2%,表明测序结果可靠性较高。本实验对枯萎病菌进行了分子鉴定,筛选出拮抗作用较强的木霉菌株TM,研究了枯萎病侵染的情况下,木霉对黄瓜根系ROS积累的影响、对细胞活力和细胞周期基因表达的调节,分析了木霉诱导的黄瓜对枯萎病抗性相关的miRNA等,进一步探索了木霉对黄瓜枯萎病的生防机制。