腹腔镜脾切断流术后腹泻患者肠道微生态表达谱改变的研究

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目的:通过16S rRNA高通量测序方法检测肝炎后肝硬化门静脉高压症患者行完全腹腔镜下脾切除联合贲门周围血管离断术(Laparoscopic splenectomy combined with pericardial devascularization,LSPD)后肠道微生态(Gastrointestinal microecology,GM)菌群表达谱情况,阐明LSPD术后出现腹泻并发症患者GM菌群表达谱的特征及改变,为LSPD术后腹泻并发症提供肠道微生态学临床依据,期望指导临床个体化精准治疗及预防策略。方法:按照严格的纳入及排除标准选取江苏省苏北人民医院肝胆胰中心自2017年12月至2018年12月收治入院的肝炎后肝硬化患者17人,所有患者均实施标准化、规范化的LSPD手术。收集所有患者入院后首次自然排便、手术后首次自然排便以及出现腹泻时的粪便样本(根据Hart and Dobb腹泻量表>12分/天)。根据样本采集时间分为术前样本和术后样本,根据Hart and Dobb评分量表分为腹泻者样本与未腹泻者样本,因此共分为4组样本,分别是腹泻者术前组、腹泻者术后组、未腹泻者术前组、未腹泻者术后组。所有粪便样本统一进行16S高通量测序检测GM菌群表达谱并行粪便常规检查。分析比较各组Chao指数、Shannon指数,LEfSe(LDA Effect Size)分析组间差异,计算B/E指数、肝硬化生态失调比率(Cirrhosis dysbiosis ratio,CDR)。结果:1.在门的水平分析:无论在术前或术后,腹泻者与未腹泻者GM之间均无显著统计学差异。2.Alpha多样性方面:(1).腹泻者术后组样本与未腹泻者术后组样本相比,GM菌群丰富度显著降低(P<0.05),而菌群的多样性的差别则无统计学意义;(2).腹泻者术前组样本与未腹泻者术前组样本相比,GM菌群丰富度显著降低(P<0.05),而菌群的多样性则无显著统计学差别。3.LEfSe组间差异分析显示:(1).腹泻者术后组与未腹泻者术后组比较,腹泻者术后组GM菌群谱表现为肠球菌属、劳特罗普氏菌属丰富度显著升高(P<0.05),而瘤胃菌科及毛螺菌科丰富度则显著低于未腹泻者术后组(P<0.05),包括罕见小球菌属、Dorea属、Anaerostipes属、罗斯伯里氏菌属、Fusicatenibacter属及毛螺菌属,另外还有消化链球菌科的Romboutsia属的丰富度显著降低(P<0.05);(2).腹泻者术前组与未腹泻者术前组两组间比较结果显示:腹泻者术前GM菌群谱表现为韦荣球菌科丰富度显著增高(P<0.05);同时,罕见小球菌属、Anaerostipes属、Romboutsia属丰度则显著低于未腹泻者术前组(P<0.05);4.B/E值及CDR结果:无论在术前还是术后,出现腹泻的患者双歧杆菌丰度及B/E比值均显著低于未出现腹泻的患者(P<0.05),同时肠杆菌丰度显著增高(P<0.05);出现腹泻的患者原生菌群丰度及CDR值均显著低于未出现腹泻的患者(P<0.05),同时非原生菌群丰度显著增高(P<0.05)。结论:1.LSPD术后出现腹泻并发症的患者GM菌群丰富度显著降低,相较于未出现腹泻的患者表现为GM更加严重失衡的状态;2.出现腹泻并发症的患者相较于未出现腹泻的患者在术前就已经出现GM严重失衡的状态,表现为有益菌减少同时条件致病菌增多;3.在LSPD术后腹泻患者的临防治策略中应考虑患者肠道微生态表达谱的具体情况,从而针对性精准化个体治疗。
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