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目的:高血压是心血管疾病的首位危险因素,其机制复杂,现代医学抗高血压治疗面临诸多瓶颈。中药复方多靶点、多途径的效应模式具有一定的临床应用价值,明确其血压调节效应及机制有助于科学合理的临床应用。高血压相关脑肠轴改变为从整体理解高血压病理形成及药物作用机制的研究提供了新的切入点。高血压相关脑肠轴改变包括大脑自主神经调控中心下丘脑室旁核（PVN区）小胶质细胞激活导致交感神经兴奋性输出增加,促进血压升高;与此同时,交感神经兴奋性增强引起肠道微生态紊乱及屏障破坏,促进系统性慢性低度炎症状态的形成,继而增强PVN区小胶质细胞激活,构成血压升高的恶性循环。本研究在探讨血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导的高血压相关中枢神经炎症表型、远端回肠及近端结肠病理改变、肠道菌群及粪便代谢组改变的基础上,进一步探讨具有降压效应的清肝益肾祛风复方（QYQ）对高血压相关脑肠轴改变的影响,为进一步理解其多靶点、多途径抗高血压效应的生物学机制提供实验依据。方法:本研究分三部分:第一部分Ang Ⅱ诱导小鼠高血压模型的建立及中枢神经炎症相关病理表型分析:采用C57BL/6J小鼠,进行Alzet渗透泵皮下输入Ang Ⅱ,构建高血压模型。将小鼠随机分为3组,即正常对照组（Control组,不给予任何处理）,假手术对照组（Sham组,皮下植入含生理盐水的渗透泵）,AngⅡ模型组（皮下植入含AngⅡ的渗透泵,490ng/kg/min）。造模手术28天后,于次日上午取材。分别于造模前1天,及造模后第7、14、28天（±2天）采用tail-cuff法测量小鼠血压。采用免疫组织化学对小鼠大脑皮层、脑白质及PVN区星形胶质细胞及小胶质细胞激活进行分析。采用Real time-PCR对小鼠PVN区炎症因子IL-6及TNFα的mRNA表达水平进行分析。第二部分QYQ干预对Ang Ⅱ诱导的高血压小鼠中枢神经炎症的影响:将小鼠随机分为3组,即假手术对照组（Sham组,皮下植入含生理盐水的渗透泵）,模型组（Vehicle组,皮下植入含Ang Ⅱ的渗透泵,490 ng/kg/min）,3QYQ组（皮下植入含Ang Ⅱ的渗透泵,490 ng/kg/min）。QYQ组自造模后第1日起开始给予QYQ灌胃,而Sham组及Vehicle组则给予同体积的生理盐水灌胃,连续28天。血压测量及Real time-PCR分析同第一部分,并采用免疫组织化学对小鼠大脑PVN区小胶质细胞激活进行分析。第三部分QYQ干预对Ang Ⅱ诱导的高血压小鼠肠道病理、菌群失调及粪便代谢组紊乱的影响:分组及干预同第二部分,在干预第27、28天及取材当天上午收集小鼠的大便样本,混匀后备用。实验一.QYQ干预对Ang Ⅱ诱导的高血压相关回肠、结肠病理改变的影响:通过H＆E染色及Masson’s trichrome染色对远端回肠及近端结肠组织病理及纤维化改变进行分析;实验二.QYQ干预对Ang Ⅱ诱导的高血压相关肠道菌群失调的影响:采用16S rDNA测序,对各组肠道菌群构成进行分析和比较;实验三.QYQ干预对Ang Ⅱ诱导的高血压相关粪便代谢组学改变的影响:采用非靶向超高液相色谱串联质谱,对各组小鼠粪便代谢谱进行分析和比较。结果:第一部分:1.Ang Ⅱ（490ng/kg/min）经皮下渗透泵输入引起小鼠血压持续性升高;2.Ang Ⅱ（490ng/kg/min）经皮下渗透泵输入引起PVN区小胶质细胞显著激活,但大脑皮层及脑白质中小胶质细胞无激活改变;3.Ang Ⅱ（490 ng/kg/min）经皮下渗透泵输入未引起大脑中星形胶质细胞激活改变;4.Ang Ⅱ（490 ng/kg/min）经皮下渗透泵输入引起PVN区促炎因子IL-6、TNFα mRNA表达水平显著上调。第二部分:1.QYQ干预显著抑制Ang Ⅱ诱导的血压升高;2.QYQ干预显著降低Ang Ⅱ诱导的高血压小鼠PVN区小胶质细胞激活,降低PVN区促炎因子IL-6、TNFα mRNA表达水平。第三部分:1.肠道病理分析:（1）Ang Ⅱ诱导的高血压模型可见回肠肠壁肌层增厚、绒毛变短、杯状细胞数量减少、粘膜下纤维化,以及结肠肠壁肌层增厚等病理改变;（2）QYQ干预显著抑制Ang Ⅱ诱导的高血压小鼠回肠及结肠病理改变的形成。2.肠道菌群分析:（1）AngⅡ诱导的高血压小鼠肠道菌群α多样性下降,QYQ干预可显著抑制其α多样性下降;（2）PCoA结果表明三组间小鼠肠道菌群构成具有显著差异,模型组与假手术对照组完全分离,而QYQ干预组与假手术对照组有部分重叠,提示QYQ干预可部分抑制AngⅡ引起的高血压肠道菌群失调;（3）模型组pActinobacteria、pAcidobacteria、oMyxococcales、fBacteroidaceae及gTyzzerella等的丰度显著升高,而fEnterobacteriaceae、fRikenellaceae、gAlistipes及gRikenellaceaeRC9gutgroup等丰度显著降低。相关性分析结果表明,模型组中升高的菌群丰度与血压呈正相关,而降低的菌群丰度与血压呈负相关。QYQ干预可抑制上述菌群失调的表型。3.粪便代谢谱分析:（1）PLS-DA分析结果表明QYQ干预抑制了部分Ang Ⅱ诱导的高血压小鼠粪便代谢物含量的改变;（2）AngⅡ诱导的高血压小鼠存在22个含量显著改变的粪便代谢物,QYQ干预可显著抑制其中3个代谢物的含量改变,即模型组小鼠粪便中DPAn-6和去甲脱氧胆酸含量显著升高,QYQ干预显著抑制其升高;模型组小鼠粪便中牛磺胆酸含量显著降低,而QYQ干预显著抑制其降低。相关性分析结果表明,DPAn-6和去甲脱氧胆酸水平与血压呈正相关,牛磺胆酸水平与血压呈负相关。结论:1.本研究表明Ang Ⅱ诱导的高血压小鼠模型存在脑肠轴相关改变,包括PVN区小胶质细胞特异性激活及促炎因子IL-6、TNFα mRNA表达水平显著上调等中枢神经炎症表现;远端回肠及近端结肠病理改变;肠道菌群及粪便代谢物失调。2.本研究表明QYQ干预可显著降低Ang Ⅱ诱导的高血压,提示其具有拮抗AngⅡ生物学效应的作用;同时,QYQ显著抑制Ang Ⅱ高血压小鼠中枢神经炎症,保护肠道结构屏障,调节肠道菌群及粪便代谢物失调。3.本研究提示QYQ在调控血压的同时,对高血压相关脑肠轴改变具有显著的干预效应,为其多靶点、多途径防治高血压及其相关病理形成的作用及机制提供了进一步的实验依据。