氧化苦参碱对胃癌SGC-7901细胞株Ras/Raf通路的影响

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氧化苦参碱(Oxymatrine,OXY)是从中药苦豆子中提取的有效成分,是苦参的主要活性成分,具有抗炎、抗过敏、抗纤维化、免疫调节及抗肿瘤等多种药理活性。已有实验表明OXY可抑制胃癌SGC-7901细胞的活性[1],为了阐明OXY抑制胃癌SGC-7901细胞活性的作用机制,本实验进一步探讨OXY对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用与Ras/Raf信号通路的关系。目的观察OXY对胃癌SGC-7901细胞株Ras/Raf通路中上游Ras及下游Raf蛋白及mRNA表达的影响,深入探讨OXY对肿瘤的抑制作用。方法1.首先在体外进行胃癌细胞SGC-7901的培养。2.采用CCK8检测不同浓度(0mg/ml,1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml)[2]的OXY在不同时间(24h,48h和72h)对SGC-7901胃癌细胞活性的影响。3.利用实时荧光定量PCR法来观察不同浓度(0mg/ml,1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml)的OXY在48h对胃癌SGC-7901细胞株Ras/Raf通路中Ras和Raf mRNA表达水平的影响。4.利用Western Blot法来检测不同浓度(0mg/ml,1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml)的OXY对胃癌SGC-7901细胞株处理48h后Ras/Raf通路中Ras和Raf蛋白表达的影响。结果与对照组(0mg/ml)相比,不同浓度(1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml)的OXY处理后细胞活性率为(24h:75.62%±5.04%,64.75%±3.72%,56.01%±4.36%Vs88.67%±5.03%,F=205.7,p<0.001;48h:70.02%±2.65%,58.07%±5.01%,51.33%±3.51%Vs86.33%±5.69%,F=22.54,p=0.001;72h:59.11%±3.48%,51.23%±4.51%,44.67%±6.03%V s84.67%±4.16%,F=21.92,p=0.002);不同浓度OXY(1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml)作用于胃癌SGC-7901细胞48h后Ras及Raf mRNA相对表达量分别为(0.79%±0.03%,0.64%±0.03%,0.44%±0.03%,F=229.5,p<0.001;0.78%±0.03%,0.61%±0.03%,0.50%±0.02%,F=203.3,p<0.001);不同浓度(1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml)的OXY作用于胃癌SGC-7901细胞48h后Ras及Raf蛋白相对表达量分别为(0.82%±0.03%,0.64%±0.04%,0.42%±0.02%,F=207.3,p<0.001;0.68%±0.03%,0.59%±0.02%,0.32%±0.02%,F=201.6,p<0.001);OXY在胃癌SGC-7901细胞株中能够下调Ras/Raf信号转导通路中正调控因子Ras和Raf蛋白及mRNA的表达水平(p<0.05)。结论OXY通过抑制胃癌SGC-7901细胞株Ras及Raf蛋白和mRNA的表达,抑制Ras/Raf信号转导通路的激活,从而起到抑制胃癌的作用。
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