论文部分内容阅读
目的:探讨miR-451a/YWHAZ对肺腺癌H1299细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法:1.通过GEO数据库筛选出在NSCLC组织和癌旁组织中差异表达的miRNA,并选择差异性显著的miR-451a进行研究。2.用RT-qPCR在人正常肺上皮BEAS-2B细胞、人肺腺癌A549、H1299细胞和人肺鳞癌H226细胞中检测miR-451a的表达情况,选择miR-451a低表达的细胞株作为研究对象;观察过表达miR-451a对实验细胞株增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。3.在TargetScan、miRDB和miRanda三个生物信息学数据库中预测miR-451a的靶点为YWHAZ;双荧光素酶报告实验验证YWHAZ与miR-451a存在结合位点。4.观察敲减YWHAZ对实验细胞株增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果:1.在GEO数据库中,miRNA-451a在397例NSCLC组织中的表达低于151例癌旁组织,且差异具有统计学意义(P<0.05)。2.miR-451a在3株NSCLC细胞系中的表达明显低于人正常肺上皮细胞BEAS-2B,其中人肺腺癌细胞H1299表达最低;高表达H1299细胞中的miR-451a后,克隆形成实验的结果显示,oe-miR451a组的克隆形成数(10.06±4.31个/平皿)比oe-NC组(43.87±5.16个/平皿)减少,且差异具有统计学意义(P<0.05);划痕修复实验结果显示,oe-miR451a组的细胞划痕愈合率(35.11%±5.23%)与oe-NC组(68.35%±6.61%)相比明显减少,且差异具有统计学意义(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验的结果显示,oe-miR451a组的细胞迁移数(39.98±5.75个/视野)与oe-NC组(119.69±12.29个/视野)相比明显降低,且差异具有统计学意义(P<0.05),oe-miR451a组的细胞侵袭数(43.48±4.86个/视野)与oe-NC组(103.97±7.11个/视野)相比明显降低,且差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞术的结果显示,oe-miR451a组的细胞凋亡率(5.87%±1.04%)与oe-NC组(1.10%±0.31%)相比明显升高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。3.在TargetScan、miRDB和miRanda三个生物信息学数据库中预测出YWHAZ为miR-451a的靶点;双荧光素酶报告实验提示YWHAZ为miR-451a的靶基因。4.敲减H1299细胞中的YWHAZ后,克隆形成实验的结果显示,si-YWHAZ组的克隆形成数(16.42±4.43个/平皿)比si-NC组(49.11±7.36个/平皿)减少,且差异具有统计学意义(P<0.05);划痕修复实验结果显示,si-YWHAZ组的细胞划痕愈合率(50.46%±4.21%)与si-NC组(86.92%±5.50%)相比明显减少,且差异具有统计学意义(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验的结果显示,si-YWHAZ组的细胞迁移数(64.62±6.55个/视野)与si-NC组(134.96±10.31个/视野)相比明显降低,且差异具有统计学意义(P<0.05),si-YWHAZ组的细胞侵袭数(36.82±4.16个/视野)与si-NC组(102.49±8.60个/视野)相比明显降低,且差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞术的结果显示,si-YWHAZ组的细胞凋亡率(12.07%±1.93%)与si-NC组(2.99%±0.57%)相比明显升高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.miR-451a在NSCLC细胞系中呈低表达,过表达miR-451a能抑制肺腺癌H1299细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。2.miR-451a靶向YWHAZ调控肺腺癌细胞的生长与功能,可能为肺腺癌的诊疗提供有价值的靶点和分子标记。