【摘 要】
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目的本研究探讨万寿菊叶黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖凋亡及ER蛋白表达的影响。并通过对增殖凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及ER表达的检测,探讨其影响乳腺癌凋亡的作用机制,为叶黄素的临床应用提供实验依据。方法采用CCK8法检测体外培养的处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞。将细胞随机分为六组:叶黄素处理组及对照组,分别设置时间梯度进行实验。观察叶黄素对MCF-7细胞增殖的影响,根据吸光度值,绘制M
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目的本研究探讨万寿菊叶黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖凋亡及ER蛋白表达的影响。并通过对增殖凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及ER表达的检测,探讨其影响乳腺癌凋亡的作用机制,为叶黄素的临床应用提供实验依据。方法采用CCK8法检测体外培养的处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞。将细胞随机分为六组:叶黄素处理组及对照组,分别设置时间梯度进行实验。观察叶黄素对MCF-7细胞增殖的影响,根据吸光度值,绘制MCF-7细胞正常成长曲线。根据公式:抑制率=(1-药物组A值/对照组A值)×100%,计算乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率,绘制不同时间及不同浓度下细胞生长曲线;计算IC50值以选取最适叶黄素药物浓度。电子显微镜下观察叶黄素处理后不同浓度下细胞形态变化。流式细胞法检测不同浓度叶黄素对MCF-7细胞凋亡率的影响。免疫蛋白印迹技术检测不同浓度叶黄素处理后MCF-7细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白表达变化及雌激素受体ERα和ERβ蛋白表达变化。实时荧光定量PCR进一步检测不同浓度下凋亡因子Bax及Bcl-2,增殖因子Ki67,雌激素受体ERα和ERβ相对表达量的变化。结果叶黄素对乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有显著的抑制作用,并呈时间和剂量依赖关系(P<0.05)。叶黄素作用于MCF-7细胞48h的IC50值为39.153μg/ml,故选取最佳药物浓度为40μg/ml。经叶黄素处理后的MCF-7细胞与对照组比较,出现明显的细胞形态学变化提示叶黄素有一定的细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示叶黄素提高MCF-7细胞凋亡率且凋亡率与叶黄素浓度呈现明显剂量依赖关系(P<0.05)。蛋白免疫印迹技术检测结果显示叶黄素作用48h后乳腺癌MCF-7细胞中Bcl-2蛋白、雌激素受体ERα的表达明显下调(P<0.05),Bax蛋白、雌激素受体ERβ的表达明显上调(P<0.05)。且呈现出明显的剂量依赖关系。实时荧光定量PCR结果显示叶黄素作用48h后乳腺癌MCF-7细胞中Bcl-2、Ki67、雌激素受体ERαm RNA表达量明显减少(P<0.05),Bax、雌激素受体ERβm RNA表达明显增加(P<0.05)。结论万寿菊叶黄素对MCF-7乳腺癌细胞的增殖有抑制作用,并能诱导MCF-7细胞凋亡。且在MCF-7乳腺癌细胞中可能通过调控雌激素受体ERα和ERβ的表达影响细胞分化。
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