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【背景】Ficolin是凝集素途径激活补体的关键分子之一,Pilely K等人最近在人颈动脉粥样硬化斑块中发现了ficolin-2的表达,并且证实ficolin-2通过凝集素途径激活补体系统,参与动脉粥样硬化的发生及发展。巨噬细胞泡沫化是动脉粥样硬化的主要病理特征,体内及动物实验表明细胞因子IL-1β、IL-18在巨噬细胞泡沫化中发挥重要作用,且巨噬细胞分泌IL-1β、IL-18的过程主要受NLRP3炎症小体的调控,该过程影响巨噬细胞泡沫化的程度及动脉粥样硬化病变的进展。并且研究表明在巨噬细胞泡沫化过程中,补体系统激活后可调节NLRP3炎症小体活性,促进巨噬细胞分泌IL-1β和IL-18。基于这些实验研究,我们推测“ficolin-2介导的凝集素途径可能通过调节巨噬细胞NLRP3炎症小体活性,促进巨噬细胞分泌IL-1β、IL-18,进而影响巨噬细胞泡沫化”。本研究选取THP-1单核细胞作为研究对象,探讨ficolin-2通过凝集素途径激活补体系统后影响巨噬细胞泡沫化的可能机制。【目的】探讨ficolin-2对巨噬细胞NLRP3炎症小体的活性、IL-1β和IL-18的分泌及巨噬细胞泡沫化的影响。【方法】佛波酯(100ng/ml)孵育THP-1单核细胞24小时,诱导其转化为巨噬细胞,不同浓度ox-LDL(0ug/ml,25ug/ml,50ug/ml,100ug/ml)处理巨噬细胞24小时,或50ug/ml ox-LDL处理巨噬细胞不同时间(0小时,12小时,24小时,48小时)后,提取细胞RNA通过qRT-PCR方法检测巨噬细胞ficolin-2、NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平;收集细胞上清液通过ELISA法检测巨噬细胞分泌IL-1β及IL-18的浓度;对巨噬细胞进行油红O染色观察细胞荷脂情况;采用酶法检测细胞内总胆固醇及游离胆固醇含量,以评估其泡沫化程度。通过基因沉默技术干预巨噬细胞ficolin-2表达,50ug/ml ox-LDL孵育细胞24小时后,通过上述不同方法评估ficolin-2对巨噬细胞NLRP3炎症小体的活性、IL-1β及IL-18的分泌,以及对巨噬细胞泡沫化的影响。【结果】1.0-50 ug/ml ox-LDL呈浓度依赖性增加巨噬细胞ficolin-2、NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA的表达以及IL-1β和IL-18的分泌(与0 ug/ml ox-LDL组比较P<0.05),并增加巨噬细胞荷脂水平以及细胞泡沫化程度。当ox-LDL浓度为50 ug/ml时,巨噬细胞ficolin-2、NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达最显著,细胞分泌IL-1β及IL-18的浓度最高,细胞内荷脂最明显,巨噬细胞泡沫化程度最高。2.在0-24小时内,ox-LDL呈时间依赖性增加巨噬细胞ficolin-2、NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA的表达以及IL-1β和IL-18的分泌(与0小时组比较P<0.05),并增加巨噬细胞荷脂水平以及细胞泡沫化程度。在24小时时,巨噬细胞ficolin-2、NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达最显著,细胞分泌IL-1β及IL-18的浓度最高,细胞内荷脂最明显,巨噬细胞泡沫化程度最高。3.使用100nmol siRNA转染巨噬细胞48小时敲减ficolin-2 mRNA表达,50 ug/ml ox-LDL处理细胞24小时后,与ficolin-2 mRNA未敲减组比较,敲减ficolin-2 mRNA表达后巨噬细胞NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达下降(P<0.05),和细胞分泌IL-1β及IL-18的浓度下降(P<0.05),并且细胞内荷脂以及巨噬细胞泡沫化程度均降低。【结论】ficolin-2介导的凝集素途径可能通过上调巨噬细胞NLRP3炎症小体活性进而促进巨噬细胞泡沫化。