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研究背景和目的:乙型肝炎病毒X蛋白（Hepatitis B Virus X protein,HBx）与原发性肝癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）的发生发展密切相关。此前研究包括课题组前期研究均发现HBx可通过多种信号通路促进肝癌细胞自噬。另一方面,在肝癌细胞中以NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白（NOD-like receptor family,pyrin domain containing,NLRP3）为特征的炎性蛋白被检测到呈低表达,但是此低表达与HBV及其相关抗原的关系未进一步阐述。此外,大量研究均发现自噬与炎性小体之间存在着密切联系,且在多数情况下以氧化应激或损伤因素上调自噬进而抑制NLRP3炎性小体的活性为主,但此过程尚未在肝癌细胞中探讨过。因此,本研究的目的是初步阐明并探讨在HBV相关HCC中,HBV并进一步定位于HBx分别对自噬及NLRP3炎性小体的影响,以及自噬和NLRP3炎性小体之间相互调节的方式。研究方法:组织学实验:收集44例原发性肝癌患者标本,行免疫组织化学染色检测如下指标:（1）自噬指标:微管相关蛋白1轻链3-β（microtubule associated protein 1 light chain 3 beta,LC3B）、Beclin-1;（2）炎性指标:NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（Apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain（CARD）,ASC）。利用Image Pro Plus软件计算目的蛋白的平均光密度值IOD/area并进行半定量分析:应用T检验分析癌组织与癌旁组织中目的蛋白的表达是否存在差异;按患者术前HBV载量分四组后,应用单因素方差分析方法分析HBV载量同癌组织中目的蛋白的表达的关系,并结合细胞实验中HBV全长稳转细胞株Hep G2.2.15与对照细胞Hep G2的自噬与炎性小体表达的差异进一步验证HBV的作用;接着,应用Pearson相关性分析方法分析癌组织中LC3B与NLRP3分子之间的相关性,进而按HBV载量分组后判断二者是否依然相关。细胞学实验:Hep G2细胞分别转染p GEM-HBV质粒与p GEM-HBV-*7质粒,以此分析敲除HBV全长质粒中HBx的表达对细胞的自噬及NLRP3炎性小体的表达的影响;Hep G2细胞分别转染pc DNA3.1空载质粒和pc DNA3.1-HBx重组质粒,以此分析过表达HBx对自噬与NLRP3炎性小体的影响。最后,在HBx高表达时,分别用巴伐洛霉素A1（Bafilomycin A1,Baf-A1）、3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine,3-MA）以及雷帕霉素（Rapamycin）阻断或增强自噬过程,检测NLRP3炎性小体的表达;在HBx高表达时,通过转染NLRP3重组质粒和利用H2O2激活NLRP3炎性小体两种方式来观察自噬水平,进一步在H2O2处理后加特异性NLRP3活性抑制剂MCC950干预来观察自噬的改变,以此分析在HBx的作用下,Hep G2细胞中自噬与NLRP3炎性小体之间相互调节的方式。研究结果:第一部分,HCC患者癌组织中LC3B表达高于癌旁组织,NLRP3表达低于癌旁组织。第二部分,HBV载量高的患者癌组织中LC3B表达也较高而NLRP3表达则较低;在细胞实验中,Hep G2.2.15细胞的LC3自噬小体数量和蛋白水平均高于Hep G2细胞,NLRP3炎性小体的表达低于Hep G2细胞,以上结果提示HBV分别上调肝癌细胞自噬表达及下调NLRP3炎性小体的表达。此外,癌组织的LC3B与NLRP3的表达整体呈负相关（R=-0.508,p<0.01）,按术前HBV载量分组后,HBV阳性组二者依然呈中等强度负相关（R=-0.643,p0.05）,提示LC3B与NLRP3的负相关关系与HBV有关。第三部分,转染p GEM-HBV-*7质粒组较p GEM-HBV质粒组LC3B表达下调,NLRP3炎性小体表达上调;过表达HBx后结果相反,同时过表达HBx的Hep G2细胞中LC3自噬小体数量高于对照组,提示HBx上调Hep G2细胞的自噬水平及下调NLRP3炎性小体的表达。第四部分,在HBx高表达时,阻断自噬后NLRP3炎性小体表达增高,增强自噬后NLRP3炎性小体表达降低;过表达NLRP3分子并不影响LC3B改变,而用H2O2激活NLRP3炎性小体后LC3B上调,进一步用MCC950抑制活化的NLRP3炎性小体后LC3B下降,提示在HBx过表达的Hep G2细胞中,细胞通过自噬抑制NLRP3炎性小体的表达,而激活NLRP3炎性小体可增强自噬水平。结论:HBV感染细胞后,HBx促进肝癌细胞自噬并下调NLRP3炎性小体的表达;而活化的NLRP3炎性小体有增强自噬作用,提示HBx可通过增强肝癌细胞自噬表达部分抑制NLRP3相关炎症反应,两者可能存在负反馈的相互作用。