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上世纪80年代,石家庄市中医院名老中医邢月朋首次提出急性心肌梗死为“心痈”理论,认为其病机为瘀毒壅盛,闭阻心脉,故选用具有祛瘀解毒功效的四妙勇安汤治之。临床发现四妙勇安汤对于改善急性心肌梗死后心室重塑具有良好效果。实验目的:本次实验研究拟探讨四妙勇安汤抗心肌纤维化作用及其作用机制。实验方法:本实验通过差速贴壁法培养心肌成纤维细胞,依据形态学、免疫组化法进行细胞鉴定,通过AngⅡ造模,随机分为模型对照组、正常对照组、四妙勇安汤高、中、低剂量组,MTT法检测细胞增殖与活力,ELISA法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白含量,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,Western Blot检测JNK蛋白表达。实验结果:(1)MTT法检测细胞增殖与活力:与正常对照组比较,模型对照组细胞增殖明显(P<0.05);与模型对照组比较,四妙勇安汤各剂量组均可明显抑制细胞增殖(均P<0.05),且在一定范围内呈现浓度及时间依赖性。(2)ELISA法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白含量:与正常对照组比较,模型对照组Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白含量均明显增加(均P<0.05);与模型对照组比较,四妙勇安汤中、高剂量组均可降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白(均P<0.05),而低剂量组仅降低Ⅲ型胶原蛋白含量(P<0.05),对Ⅰ型胶原蛋白无统计学意义(P>0.05)。(3)流式细胞仪检测细胞增殖周期及凋亡率:与正常对照组比较,AngⅡ可以明显降低G1期心肌成纤维细胞的百分比(P<0.05),增加S期+G2期百分比(P<0.05),下调细胞凋亡率(P<0.05);与模型对照组比较,四妙勇安汤中、高剂量组均可明显增加G1期的百分比(均P<0.05),降低S期+G2期的百分比(均P<0.05),上调细胞凋亡率(均P<0.05)。而四妙勇安汤低剂量组可上调细胞凋亡率(P<0.05),对G1期、S期+G2期百分比均无统计学意义(均P>0.05)。(4)Western Blot检测JNK蛋白:与正常对照组相比较,模型对照组能明显降低JNK蛋白水平(P<0.05);与模型对照组比较,四妙勇安汤各剂量组均可上调JNK表达(均P<0.05),并在一定范围内呈现浓度依赖趋势,随着浓度的升高其调节作用越强。实验结论:(1)四妙勇安汤能够抑制心肌成纤维细胞增殖与活性(且具有一定的浓度、时间依赖性),能够抑制Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的合成、分泌,具有抗心肌纤维化作用。(2)四妙勇安汤能够调节细胞周期与凋亡率:增加心肌成纤维细胞G1期百分比,降低S期+G2期百分比,上调细胞凋亡率。(3)四妙勇安汤抗心肌纤维化作用机制可能与上调JNK信号通路有关,且存在量效关系。