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第一部分:FAM83D在肺腺癌中的表达特征及临床意义的探索[目的]肺癌是目前世界上发病人数及死亡人数最多的恶性肿瘤。近年来,肺腺癌发病率增长迅速,甚至已超过肺鳞癌成为非小细胞肺癌最主要的病理类型。有研究表明,FAM83家族(Family with sequence similarity 83)与多种肿瘤的发生发展相关。本研究旨在探索FAM83D成员在肺腺癌中的表达情况,并分析其表达与临床病理分期间的关系以及与肺腺癌患者预后之间的相关性。[方法]应用肿瘤基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)肺腺癌数据库验证FAM83D在肺腺癌组织中表达显著高于癌旁正常组织,且运用Cox回归分析探索了 FAM83D表达与肺腺癌患者总体生存之间的关系。后选取了江苏省肿瘤医院胸外科60例肺腺癌和癌旁正常组织标本,使用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法与免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)染色的方法检测FAM83D的表达情况并分析其表达与临床病理表现的关系。[结果]TCGA肺腺癌数据库分析结果显示:FAM83D在肺腺癌组织中的表达显著高于对应的癌旁正常肺组织,卡方检验显示FAM83D高表达与年龄没有相关性(p=0.3164),但与更大的原发肿瘤(p<0.0001)、淋巴结转移(p=0.0049)以及更高的TNM分期(p<0.0001)正相关。Kaplan-Meier生存分析显示,肿瘤组织FAM83D高表达相较于低表达组,生存明显下降(HR=1.890,p=0.0003)。综合FAM83D表达水平、性别、T分期、N分期以及TNM分期等临床参数,多因素Cox回归分析提示,FAM83D高表达(p=0.006)与更高阶的TNM分期(p=0.012)是两个影响肺腺癌病人总体生存的独立危险因素。[结论]FAM83D在肺腺癌组织中高表达,且肺腺癌组织FAM83D高表达提示着不良的预后。FAM83D可能参与了肺腺癌的恶性进展。第二部分:FAM83D在肺腺癌中体内外功能实验和相关机制的探索[目的]FAM83D可能是一个潜在的促进肺腺癌恶性表型的促癌基因。本研究旨在探讨FAM83D蛋白在肺腺癌中的表达,并分析其与肺腺癌恶性表型的关系及其潜在的调控机制,为肺腺癌的临床治疗提供新的靶点。[方法]1.使用qRT-PCR方法和western blot法分别检测肺腺癌细胞系中FAM83D的mRNA和蛋白的表达情况。2.设计特异siRNA干扰FAM83D的表达,体外功能实验探讨FAM83D对肿瘤增殖、迁移能力及细胞周期、凋亡的影响。3.体内裸小鼠移植瘤模型实验观察FAM83D的干扰对肺腺癌细胞在裸小鼠皮下生长的影响。4.运用KEGG通路分析及GO富集分析预测FAM83D发挥作用的可能通路。5.使用qRT-PCR方法和western blot法检测沉默FAM83D后相关细胞周期蛋白的的mRNA和蛋白的表达情况变化。6.进行拯救实验进一步验证FAM83D与潜在靶基因的上下游关系。[结果]1.FAM83D在肺腺癌细胞系的表达明显高于肺上皮正常细胞。沉默FAM83D后A549和H1299细胞株的增殖、迁移和侵袭能力明显降低,并使细胞周期阻滞在G1期。2.裸小鼠荷瘤实验显示,沉默FAM83D后肿瘤的生长速度及体积均小于对照组。对移植瘤进行免疫组化染色显示,沉默FAM83D的实验组的Ki-67染色低于对照组(p<0.05)。3.qRT-PCR和western blot结果显示,沉默FAM83D后,细胞周期蛋白CCND1与CCNE1的表达也受到了明显的抑制,而其它的细胞周期调控基因的表达没有显著差异。4.在沉默FAM83D的肺腺癌细胞中过表达CCND1或CCNE1可以部分拯救减弱的恶性表型。[结论]我们的实验结果显示FAM83D在肺腺癌细胞系中高表达,可促进肺腺癌细胞的增殖和迁移侵袭能力。FAM83D可能通过影响重要cyclin如CCND1、CCNE1的表达,促进细胞周期的进展,进而发挥其癌基因的功能,因此FAM83D可能作为一个潜在的治疗靶标,为未来肺腺癌的诊治提供新的思路。