内皮祖细胞移植对肾脏急性缺血再灌注损伤的影响及其机制研究

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目的:进行EPC移植,观察内皮祖细胞(EPCs)对急性缺血再灌注损伤(IRI)大鼠肾组织形态和功能的影响,探讨EPCs对肾脏急性IRI的影响及其可能机制。  方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离获取骨髓单个核细胞,体外定向诱导、扩增培养内皮祖细胞(EPCs),并用氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)荧光染料标记;将45只雄性SD大鼠随机分为三组,即EPCs移植组(EPCs组,n=15),对照组(IRI组,n=15),假手术组(Sham组,n=15)。EPCs组夹闭双侧肾蒂45min,再灌注后经股静脉移植用CM-Dil标记的EPCs;IRI组夹闭双侧肾蒂45min,再灌注后经股静脉注入等量生理盐水;Sham组假手术后经股静脉注入等量生理盐水。观察:(1)EPCs移植对肾脏IRI后不同时间点血肌酐、尿素氮、肾组织形态学和细胞凋亡的影响;(2)移植的EPCs对损伤肾小管周毛细血管的修复作用;(3)CM-Dil标记的EPCs在肾组织中的分布特征。  结果:经CM-Dil荧光染料标记的EPCs阳性率接近100%,IRI组、EPCs组大鼠血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)均显著高于Sham组,但EPCs组血BUN、Scr水平却较同一时间的IRI组低(P<0.05);肾小管间质损伤程度及肾小管上皮细胞凋亡数量明显下降(P<0.01);EPCs组肾小管周毛细血管密度明显增加(P<0.01);VEGF表达水平较IRI组明显升高(P<0.05);荧光显微镜显示移植的EPCs主要分布于大鼠肾脏皮髓交界处,且以术后72h最为显著。  结论:EPCs移植可显著减轻IRI肾脏的病理性损伤,抑制细胞凋亡,促进毛细血管内皮修复,促进VEGF等细胞因子分泌,改善肾脏急性IRI后的肾功能,对损伤肾脏产生保护作用。
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