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目的:探讨大鼠神经干细胞移植治疗大鼠脑出血的疗效,观察移植的神经干细胞在大鼠脑内分化及转归。 方法:取孕15日胎鼠海马齿状回颗粒下区,通过机械分离及胰酶消化制得细胞悬液。采用培养基选择法对神经干细胞进行培养及纯化。采用Nestin对所提取的神经干细胞进行表型鉴定。体外采用CCK-8检测神经干细胞在4种培养基中的生长及增殖状况,即EGF组(20ng/ml)、bFGF组(20ng/ml)、EGF+bFGF组(各20ng/ml)和对照组。在大鼠脑立体定位仪辅助下,采用胶原酶法在大鼠左侧纹状体处制作脑出血模型60只,另选择30只作为对照组,仅注入等量的生理盐水。术后24小时将体外纯化及培养的BrdU标记的神经干细胞移植到出血区域。术后1、7、14、21、28天采用改良神经功能评分量表(mNSS)及改良肢体放置评分量表(MLPT)来评估大鼠神经功能恢复情况。测量大鼠伤侧脑组织干湿重比,ELISA法检测出血区脑组织 TNF-α、IL-6和IL-10的水平。Tuj1和GFAP的免疫荧光染色评估神经干细胞移植后的分化状况。 结果:随时间的推移,各组神经干细胞均有不同程度的增殖,但EGF+bFGF组的神经干细胞在培养第7天时,达到7.3×104个。显著高于其余各组(P<0.05)。GFAP和Tuj1染色证实体外神经干细胞能否分化为胶质细胞及神经元。各组大鼠术后1、7、14、21、28天时假手术组均无神经功能障碍,mNSS和MLPT评分均为0。干细胞移植组在第1天后的各个时间点的mNSS和MLPT评分均显著低于同时间点的脑出血组(P<0.05)。在第28天时,神经干细胞移植组的mNSS评分为3.05±0.37,而MLPT评分为1.61±0.17。假手术组大鼠在各个时间点的创伤侧脑组织干湿比重值均较为稳定,而脑出血组在术后28天仍然高达79.34%,显著高于神经干细胞移植组的77.94%(P<0.05)。GFAP和Tuj1染色证实移植的干细胞能在损伤区域分化为神经元和胶质细胞。假脑出血组TNF-α和IL-6水平在术后第7,14,21,28天均显著高于神经干细胞移植组(P<0.05),而IL-10在上述时间点则均显著低于神经干细胞移植组(P<0.05)。 结论:胎鼠海马齿状回颗粒下区能成功分离出活性较好的神经干细胞。神经干细胞移植入大鼠脑出血模型后能够显著的促进大鼠神经功能恢复,减轻炎症反应及脑水肿。