饲料中添加黄连素对美洲鳗鲡幼鱼生长、肠道免疫及代谢的影响

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黄连素是从黄连(Coptis chinensis)等中草药中提取的一种生物碱,具有抗氧化、抗菌、降脂等多种生物学活性。其主要应用于改善陆生动物肠道健康及促生长,在水生动物应用方面的研究报道较少。本研究以美洲鳗鲡(Anguilla rostrata)幼鱼为试验动物,于饲料中添加不同水平黄连素,分析其对生长性能、血清生化指标的影响;从炎症细胞因子表达、肠道组织学形态、肠道菌群结构分析其抗炎作用;并结合肠道代谢组学研究来评价其添加效果,确定最适添加剂量。主要试验结果如下:1、饲料中添加50 mg/kg-400 mg/kg黄连素(BBR50组、BBR100组、BBR200组和BBR400组)显著影响美洲鳗鲡的终末体重、增重率、特定生长率和饲料效率等生长性能指标(P<0.05),其中BBR100组最为显著。不同水平黄连素处理组鱼体水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量等体成分指标均无显著变化(P>0.05)。不同水平黄连素处理组血清生化指标明显不同:血清白蛋白、补体C3、免疫球蛋白M水平显著提高(P<0.05),其中以BBR100组最高;除BBR100组外,其他处理组对血清酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性无显著影响(P>0.05);BBR100组的尿素氮含量、D-乳酸水平和二胺氧化酶活性显著降低(P<0.05)。BBR100组肠道脂肪酶和蛋白酶活性显著增加(P<0.05),淀粉酶无显著变化(P>0.05)。添加100 mg/kg黄连素显著提高美洲鳗鲡肠道总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性以及还原型谷胱甘肽含量(P<0.05),显著降低丙二醛水平(P<0.05)。说明饲料中添加100 mg/kg黄连素提高了美洲鳗鲡幼鱼的免疫力,增强肠道消化吸收以及抗氧化的能力,促进幼鱼的生长。2、不同水平黄连素处理组调控肠道炎症因子表达明显不同:BBR50组、BBR100组、BBR200组和BBR400组TNF-α、IL-1B和IL-8表达量均低于对照组,其中BBR100组最为显著(P<0.05);4个处理组IFN-γ表达水平均高于对照组,其中BBR100组最为显著(P<0.05)。不同水平黄连素处理组肠道组织学形态变化有明显差异:BBR100组肠道皱襞高度、肌层厚度以及杯状细胞的数量显著高于对照组(P<0.05),且肠道微绒毛更为紧密。不同水平黄连素处理组肠道菌群结构发生明显变化:BBR100组和BBR400组肠道菌群Chao1指数和ACE指数相比对照组显著降低(P<0.05),BBR100组Shannon指数相比对照组显著降低(P<0.05),BBR100组Simpson指数与对照组无显著差异(P>0.05)。美洲鳗鲡肠道微生物多样性表现在门水平上主要优势菌门由无壁菌门(Tenericutes)、螺旋体门(Spirochaetae)、变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)等组成;在属水平上的主要差异菌属是新鞘氨醇杆菌属(Novosphingobium)、固氮弧菌属(Azovibrio)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和气单胞菌属(Aeromonas),BBR100组的4个菌属相比对照组和BBR400组相对丰度显著降低(P<0.05)。说明饲料中添加100 mg/kg黄连素起到了抗炎作用,在一定程度上改善了美洲鳗鲡肠道健康状况。3、代谢组学结果分析显示:BBR100组肠道中共筛选出29种差异代谢物,主要为氨基酸、脂肪酸类、有机酸等,其中20种差异代谢物相比对照组表达上调,9种差异代谢物表达下调;不同差异代谢物主要归属于9条代谢通路,其中L-谷氨酸和L-天冬氨酸是关键分子,L-谷氨酸参与了5条代谢通路,L-天冬氨酸参与了4条代谢通路。说明饲料中添加100 mg/kg黄连素能促进肠道氨基酸和蛋白质代谢。综上所述,添加100 mg/kg黄连素可以起到促生长、抗炎及增强代谢能力的作用,较好地改善了肠道健康状况。因此,初步确定在美洲鳗鲡幼鱼饲料中黄连素的最适添加水平为100 mg/kg。
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