细胞周期蛋白（cyclin）和周期蛋白依赖性激酶（cyclin dependent kinase,CDK）是细胞周期信号通路中关键的调控因子,同时也是调节卵巢发育的重要基因。micro RNA（miRNA）是一类非编码的单链RNA分子,可以通过与靶基因的3’非翻译区（3’-UTR）碱基互补配对,在转录后水平负向调控基因的表达。拟穴青蟹（Scylla paramamosain）是我国重要的养殖经济蟹类之一,但关于miRNA通过调控cyclins和CDKs相关基因进而影响卵巢发育的研究在蟹类中相对较少。在课题组前期研究的基础上,本研究通过生物信息学分析,从拟穴青蟹卵巢中鉴定的miRNA中筛选到可能参与调控cyclins和CDKs相关基因的miR-9c和miR-263a,并通过软件预测获得本研究的靶基因。同时结合质粒构建、细胞转染、实时荧光定量PCR等方法,从细胞水平和个体实验水平,验证了miRNA对靶基因的调控作用。具体结果如下:（1）通过在线软件预测,cyclin A、cyclin B、cyclin E、cyclin H、CDK1、CDK2均为miR-9c和miR-263a的靶基因。（2）将靶基因的双荧光素酶报告基因质粒和miRNA试剂共转染于HEK293T细胞中,并进行双荧光素酶报告基因检测。转染实验分为实验组和处理组,实验组分别转染miRNA增强剂（miRNA mimics）/抑制剂（miRNA inhibitor）与目的质粒,对照组分别转染miRNA打乱序列（miRNA mimics/inhibitor NC）与目的质粒。结果显示:转染了miRNA mimics与目的质粒的实验组的荧光活性显著低于转染miRNA mimics NC与目的质粒的对照组;转染了miRNA抑制剂与目的质粒的实验组的荧光活性显著高于转染miRNA inhibitor NC与目的质粒的对照组。结果初步验证了miR-9c可以调控cyclin A、cyclin B、cyclin H、CDK1、CDK2这5个靶基因,而miR-263a对6个靶基因均具有调控作用。（3）将人工合成的miRNA（agomiR-9c/263a）增强剂、miRNA抑制剂（antagomiR-9c/263a）、miRNA随机序列（miR-9c/263a-NC,经预测对靶基因无调控作用）和生理盐水分别注射到拟穴青蟹体内。每组9只青蟹,并通过实时荧光定量PCR实验验证miRNA对靶基因的调控作用。结果显示:在拟穴青蟹卵巢组织中,注射miRNA增强剂的实验组中靶基因的相对表达量显著低于对照组,而注射miRNA抑制剂的实验组中靶基因的相对表达量显著高于对照组。进一步验证了miR-9c对cyclin A和CDK1的表达具有调控作用,而miR-263a可以调控的cyclin A、cyclin B、cyclin E、cyclin H、CDK1和CDK2基因的表达。我们的研究结果为探索拟穴青蟹的生殖调控机制提供了新的思路,也进一步丰富了对无脊椎动物细胞周期对卵巢发育调控的认识。