人源性抗HFRS病毒抗体基因的获得及其真核表达载体的构建

来源 :中国人民解放军空军军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sbsb5503564
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肾综合征出血热(HFRS)在我国是危害最严重的急性病毒性传染病之一,目前尚无特异有效的治疗方法。而鼠源性单克隆抗体(mAb)对于人体来说是异种蛋白,可刺激机体产生抗鼠抗体,因此限制了其在人体的应用。八十年代末出现了噬菌体抗体库技术,使得用基因工程的方法制备人源性mAb成为可能。它可以克服用传统的杂交瘤技术制备人mAb的一些难题,如融合率不高、杂交瘤不稳定及抗体产量低等。 本研究采用逆转录PCR的方法,从HFRS恢复期患者外周血淋巴细胞(PBL)中,扩增出人抗体重链Fd基因及轻链基因。先将Fd基因克隆入噬菌粒表达载体pComb3中,转化大肠杆菌XLI-Blue,构建了重链Fd基因库,库容量为5×105,克隆效率约为66%。然后用同样的方法,将轻链基因克隆入Fd基因库内,构建成Fab抗体基因库,库容量为3×106,克隆效率约为40%。并用辅噬菌体VCSM13超感染后制备人源性噬菌体抗体库。
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