橡胶树白粉菌效应蛋白EqIsc1在致病中的功能研究

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许多病原菌在侵染植物过程中,会分泌一系列的效应蛋白以抑制寄主植物的防御反应,帮助自身更好的定殖。在一些真菌和卵菌中,发现可分泌的异分支酸酶(isochorismatase,Isc)作为效应蛋白抑制植物水杨酸的合成,破坏寄主植物的免疫防御反应。橡胶树白粉病是我国橡胶树上发生最重的病害之一,其病原菌为Erysiphe quercicola(曾被分类为Oidium heveae),对天然橡胶生产造成严重破坏。橡胶树白粉菌效应蛋白的研究可以更好地从分子层面揭示致病机理,为有效防控橡胶树白粉病提供新思路,然而,这方面的研究相对缺乏。本研究通过生物信息学方法在橡胶树白粉菌中发现了唯一的异分支酸酶编码基因EqIsc1,并初步揭示了EqIsc1在致病中如何作为效应蛋白发挥功能,主要研究结果如下:1.生物信息学分析表明:EqIsc1蛋白具有isochorismatase结构域,属于异分支酸酶蛋白家族;EqIsc1与大丽轮枝菌、大豆疫霉的异分支酸酶Vd Isc1和Ps Isc1有较高的同源性,分别为52.9%和43.3%;与白粉菌属的葡萄白粉菌Erysiphe necator的亲缘关系最近,两者同源性为80%;与Vd Isc1和Ps Isc1相同,EqIsc1也不含有信号肽,属于非经典型分泌蛋白。2.利用酿酒酵母YTK12、稻瘟病菌、酿酒酵母分泌验证系统验证EqIsc1为分泌蛋白。3.qRT-PCR结果显示,EqIsc1基因在白粉菌侵染橡胶树叶片过程中,表达量升高,在12 hpi时,基因表达量达峰值,说明EqIsc1可能主要在侵染初期发挥作用。4.在本氏烟草中表达EqIsc1能促进辣椒疫霉(Phytophthora capsici)的侵染。在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)中表达EqIsc1能促进该病菌在橡胶树叶片上的侵染。在本氏烟草中EqIsc1能够明显抑制由几丁质诱导的胼胝质积累。以上这些结果初步表明,EqIsc1可通过抑制植物防御反应来促进病原菌侵染。5.通过Pull-down和CO-IP技术共同验证,发现与EqIsc1发生互作的寄主植物MAPK激酶途径中的Hb MAPKKK5。在烟草上表达Hb MAPKKK5发现会抑制辣椒疫霉侵入但可以促进胼胝质积累,表明Hb MAPKKK5能够正向调控植物对病原菌的防御反应,而EqIsc1的表达加快了Hb MAPKKK5蛋白降解。综上,EqIsc1可能通过干扰HbMAPKKK5功能以破坏植物免疫系统。
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